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- 用途:仅用于科研研究实验
本司产品仅用于科研，不用于临床诊断和治疗
小鼠巩膜成纤维细胞
细胞简介：
小鼠巩膜成纤维细胞分离自巩膜组织，巩膜是眼球壁的主要组成之一。是眼球纤维膜的后5/6部分。前方联接角膜，后方与视神经的鞘膜延续。巩膜在视神经穿出部附近最厚，愈前愈薄，在肌腱附着处又复增厚。其与角膜交界处，外面有环形的角膜沟，深部有巩膜静脉窦。小儿的巩膜为浅蓝色，成年为白色，老年因脂肪沉着而带黄色。巩膜结构坚韧，有支持和保护眼内组织的作用。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的巩膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
培养信息：
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传3代左右
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
注意事项如下：
（1）无菌操作：细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强对无菌操作的观念，以预防为主，一旦污染，通常难以消除。
（2）培养基：所使用的培养基必须满足细胞存活和生长的必要条件。由于细胞来源的动物种类、组织类型不同，对培养基的要求也会有一定差异，必要时可通过预实验选择适宜的培养基。
（3）小牛血清：小牛血清对于维持培养细胞的存活和促进细胞增殖起着至关重要的作用。可以选择多个不同批次的小牛血清进行小样分析。一旦确定了某一厂家某一批次的小牛血清，就应坚持使用至实验结束。
（4）胶原酶溶液：必须新鲜配制，贮存时间过长（即使是低温保存在-20℃），也会影响消化效力，导致消化时间过长，增加细胞损伤。
（5）L-谷氨酰胺：几乎所有细胞对谷氨酰胺都有较高的需求，细胞需要谷氨酰胺来合成核酸和蛋白质，缺乏谷氨酰胺会导致细胞生长不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中不太稳定，在4℃冰箱贮存两周以上时，应重新加入相同量的谷氨酰胺。
（6）静置培养：原代细胞在消化分离后，放置于CO2培养箱的前24～48h（必要时达到72小时）内，应处于绝对静止状态，切忌频繁取出培养瓶观察生长情况，这会使原代分离细胞难以附着于壁面，更谈不上伸展和增殖。
（7）消化时间：通常消化至肉眼可见微小组织颗粒即可，因为此时组织颗粒已松散，稍加吹打即可形成细胞团或单个细胞，过长的消化时间往往导致细胞损伤加重，细胞培养成活率降低。
（8）其他生长因子：经过以上处理，一般原代分离细胞培养都可以成功。对于少数特殊类型的细胞，也可以考虑添加一些特殊的生长因子，例如胰岛素可以促进细胞对葡萄糖和氨基酸的摄取。此外，内毒素、EGF、FGF等也具有促进有丝分裂的作用，但费用较高。
原代细胞培养具体步骤如下：
1、准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。
3、处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30-60分钟。
4、剪切：用眼科剪把组织切成2-3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30-50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。
5、消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500-1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。
7、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2-7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。
8、培养：置于37℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。
下列是公司正在出售的产品：
| 胶原酶I型 | SV40转化的非洲绿猴肾细胞；COS-7 |
| 淋巴细胞分离液1.077 | 小鼠胚胎成纤维细胞；NIH/3T3 |
| 淋巴细胞分离液1.084 | 小鼠胚胎成纤维细胞；MEF |
| 细胞分离液 无图 | 小鼠血管内皮瘤细胞；EOMA |
| GE Ficoll-Paque PLUS淋巴细胞分离液 | 大鼠肝癌细胞；H4-II-E-C3 |
| PBMC样本密度分离液 | 大鼠骨骼肌成肌细胞；L6 |
| Percoll | 膀胱癌细胞；5637 |
| 人淋巴细胞分离液 | 膀胱癌细胞；HT-1376 |
| 细胞消化液 | 小鼠脑神经瘤细胞 |
| 细胞组织染色 | 神经母细胞瘤细胞株 |
| Bielschowsky改良法神经组织染色试剂盒 | 卵巢癌细胞 |
| Delafield苏木素-番红植物组织染色液 | 尤因氏肉瘤 |
| DiOC6(3)碘化物 | 肉瘤（未分化骨肉瘤、尤文氏肉瘤） |
| Masson三色染色试剂盒 | 骨肉瘤细胞 |
| 免疫检测 | 骨肉瘤细胞 |
| Alexa Fluor 350抗兔免疫荧光染色试剂盒 | 骨肉瘤细胞 |
| Alexa Fluor 488抗兔免疫荧光染色试剂盒 | 骨肉瘤细胞 |
| Alexa Fluor 488抗小鼠免疫荧光染色试剂盒 | 成骨肉瘤细胞 |
| Alexa Fluor 555抗兔免疫荧光染色试剂盒 | 脑星形胶质细胞瘤 |
| Alexa Fluor 555抗小鼠免疫荧光染色试剂盒 | 脑髓母细胞瘤细胞 |
| 免疫染色洗涤液(10X) | 脑髓母细胞瘤细胞 |
| 免疫染色用一抗二抗稀释液 | 脑髓母细胞瘤细胞 |
| 免疫荧光染色二抗稀释液 | 神经胶质瘤细胞小鼠巩膜成纤维细胞 |
| Alexa Fluor 647抗小鼠免疫荧光染色试剂盒 | 脑髓母细胞瘤细胞 |
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