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- 种属:人
- 产品分类:人细胞系
- 细胞形态:上皮细胞样
- 生长特性:贴壁生长
- 用途:仅供科研研究实验
细胞详情：
HCC1143人乳腺癌细胞种属来源：人
性别年龄：52 苏，白人女性
组织来源：乳腺
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞规格：1 X 106cells/T25 或 1 mL 冻存管
培养条件：RPMI1640
冻存条件：90% FBS + 10% DMSO
传代方法：1:3 传代, 2-3 天传 1 代
细胞培养操作
干冰运输：收到细胞后需立即转入液氮保存、或者-80°C冰箱短期冻存、或者直接复苏
常温运输：收到细胞后，请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代
细胞传代：细胞密度达80% - 90%，即可进行传代培养
培养瓶中细胞操作步骤
对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。
1.收到细胞后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因为运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。
2.对于贴壁细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中多余的培养基，至剩余5-8mL 左右，随后根据培养基选择合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶，请立即传代。
3.对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管，150 g 离心 5 分钟，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养。
冻存管细胞操作步骤
注意： 为保证细胞的高活率，请收到产品后，立即解冻培养。
1.将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约1分钟。
2.一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。
3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。
4.用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。
5.将细胞置于含有合适CO2的37℃恒温培养箱中培养。
贴壁细胞传代培养
1.吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS润洗一次。
2.加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3-5分钟。
3.加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。
4.将细胞悬液收集到15mL离心管里，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。取适量的培养基将细胞重悬，转移到新的培养瓶中培养。
悬浮细胞传代可参考以下方法：
一、直接传代法
1.待悬浮细胞长满至 80%～90%（细胞悬液变黄），即可传代；
2.用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3；
3.加入适量的新鲜培养基，继续培养。
二、离心传代法（在发现有细胞碎片的情况下）
1.将细胞悬液转移到离心管内；
2.150 g 离心 5 min，弃去上层清液；
3.使用新鲜的培养基重悬细胞；
4.吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。
细胞冻存操作
1.1000rpm离心5分钟去掉上清。加1 mL血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1 x 106/mL，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识；
2.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。
商品属性：
产品名称 | HCC1143人乳腺癌细胞 | 组织来源 | 乳腺 |
种属 | 人 | 货号 | AXB6274 |
冻存条件 | 90% FBS + 10% DMSO | 细胞形态 | 上皮细胞样 |
英文名称 | HCC1143:HCC1143 | 生长特性 | 贴壁生长 |
细胞系操作步骤：
(1) 细胞系培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃ CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。
(2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)
A液：用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。
B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。
分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。
(3) 吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
(4) 转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。
(5) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
(6) 瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。
细胞处理：
1） 冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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