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- 种属:小鼠
- 产品分类:小鼠细胞系
- 细胞形态:上皮细胞样
- 生长特性:贴壁生长
- 用途:仅供科研研究实验
货号 | 规格 | 种属 | 组织来源 |
AXB6133 | 1 X 106cells/T25或1 mL冻存管 | 小鼠 | 皮肤 |
商品介绍：
产品名称 | B16-F0 小鼠黑色素瘤细胞 |
英文名 | B16F0:B16-F0 |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
冻存条件 | 90% FBS + 10% DMSO |
传代方法 | 1:3传代, 2-3天传1代 |
种属来源：小鼠
性别年龄：小鼠
组织来源：皮肤
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
细胞规格：1 X 106cells/T25或1 mL冻存管
培养条件：DMEM+10% fetal bovine serum37 ℃, 5% CO2
冻存条件：90% FBS + 10% DMSO
传代方法：1:3传代, 2-3天传1代
细胞培养操作
干冰运输：收到细胞后需立即转入液氮保存、或者-80°C冰箱短期冻存、或者直接复苏
常温运输：收到细胞后，请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进行培养传代
细胞传代：细胞密度达80% - 90%，即可进行传代培养
培养瓶中细胞操作步骤
对于贴壁培养的细胞，寄送前，我们会将培养基充满整个培养瓶，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。
1.收到细胞后，请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因为运输过程中存在颠簸，且有些细胞对温度变化也很敏感，可能存在一些细胞脱落漂浮的情况，这些细胞仍是活细胞，请勿丢弃，可离心富集后传代使用。
2.对于贴壁细胞，在生物安全柜环境中，用真空泵去除培养瓶中多余的培养基，至剩余5-8mL 左右，随后根据培养基选择合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养，拧松瓶盖。如果细胞已经长满培养瓶，请立即传代。
3.对于悬浮的细胞，在生物安全柜环境中，转移培养瓶中的细胞至离心管，150 g 离心 5 分钟，去除上清后，用5 mL培养基吹散细胞，转移至新的培养瓶中，随后置于合适的CO2含量的37℃恒温培养箱中培养。
冻存管细胞操作步骤
注意： 为保证细胞的高活率，请收到产品后，立即解冻培养。
1.将冻存管置于37℃水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染，确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约1分钟。
2.一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用酒精喷拭冻存管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。
3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。
4.用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。
5.将细胞置于含有合适CO2的37℃恒温培养箱中培养。
贴壁细胞传代培养
1.吸取并弃掉培养瓶中培养基，加入PBS润洗一次。
2.加入1 mL 0.25 (w/v) Trypsin-EDTA 溶液，并置于37℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3-5分钟。
3.加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落，并使细胞分散。
4.将细胞悬液收集到15mL离心管里，150 g 离心 5 分钟，用真空泵去除上清。取适量的培养基将细胞重悬，转移到新的培养瓶中培养。
悬浮细胞传代可参考以下方法：
一、直接传代法
1.待悬浮细胞长满至 80%～90%（细胞悬液变黄），即可传代；
2.用吸管吸弃细胞悬液 1 / 2~1 / 3；
3.加入适量的新鲜培养基，继续培养。
二、离心传代法（在发现有细胞碎片的情况下）
1.将细胞悬液转移到离心管内；
2.150 g 离心 5 min，弃去上层清液；
3.使用新鲜的培养基重悬细胞；
4.吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。
细胞冻存操作
1.1000rpm离心5分钟去掉上清。加1 mL血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1 x 106/mL，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识；
2.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。
细胞培养的步骤：
细胞培养前的准备：
细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。
这些变质征象可能为多种原因所致，例如：培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质，或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。
变质严重时将会成为不可逆的变化。
细胞培养通风橱的消毒及布局
保持细胞培养通风橱内的整洁有序，将所有物品置于直视范围内。
向放入通风橱内的所有物品喷洒70%乙醇，擦拭清洁进行消毒。
在通风橱中部开阔处放置细胞培养容器；移液器置于右前方易于取用；试剂和培养基置于右后方便于吸取；试管架置于中后部；小型容器置于左后部用于盛放废液。
培养瓶/皿等物品的无菌操作
细胞培养污染物主要分为两类：
化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。
生物污染物，如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。
可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术，降低污染发生的频率和严重程度。
细胞系要求及注意事项：
实验中建立细胞系有以下要求：
1、组织来源：
细胞供体所属物种，来自人体或者动物；
个体性别、年龄；取材的器官或组织。
如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病li号等。
2、细胞生物学检测：
了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。
如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。
3、培养条件和方法：
应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。
实验中建立细胞系需要注意事项：
1. 细胞的来源和健康程度需要保证，不能使用受到污染或者有疾病的细胞。
2. 实验室需要保持清洁和卫生，定期进行消毒，以避免细胞受到感染。
3. 细胞需要充足的营养和生长因子，以促进其生长和繁殖。
4. 温度和湿度的控制对于细胞的生长也非常重要，实验室需要有恒温恒湿设备。
5. 实验室需要配备各种安全设备，例如防火设备、急救箱等，保证实验的顺利进行和人员的安全。
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