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- 细胞形态:上皮细胞样
- 生长特性:贴壁细胞
- 种属:人
- 温度:液氮
- 用途:仅用于科研研究实验
- 鉴定:STR鉴定
培养注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，，用新鲜的完全培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代 。
9. 注意： 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
公司所有产品均不得用于人类或动物之临床诊断或治疗，仅可用于工业或科研等非医疗目的。
细胞基本属性
中文名称 | 生长特性 | 贴壁生长 | |
货号 | P-X759 | 种属 | 人 |
细胞形态 | 上皮细胞样 | 温度 | 液氮 |
商品介绍：
细胞名称：HGC-27+YFP人胃癌细胞黄色荧光标记
细胞介绍：
该细胞通过慢病毒转染的方式携带 YFP 基因。
细胞特性
1） 来源：人胃癌
2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长
3） 含量：>1x10^6 细胞数
4） 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
5) 用途：仅供科研使用。
细胞筛选：
该细胞为稳定转染 YFP 的细胞，随细胞传代次数的增加，其 YFP 荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度，可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。 建议收到细胞后至少传 3 代，冻存留种后再进行筛选。
初次进行细胞筛选时，建议加入终浓度为 1ug/ml 嘌呤霉素的培养基维持培养，若无细胞漂浮或者漂浮较少，即可更换为含 2ug/ml 嘌呤霉素的培养基继续筛选，以此类推，至最高药物浓度为 5ug/ml。
若筛选过程中，漂浮细胞大于 60%，则停止筛选，换成正常培养基培养，至细胞密度约 80%，可继续加入同浓度嘌呤霉素进行筛选。当加入 5ug/ml嘌呤霉素时细胞正常增殖，可停止筛选，用不含药培养基正常培养。
运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：
（1）1mL 冻存管包装干冰运输，收到后-80 度
冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细
胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25 瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在 4 或 5X 显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在 37℃培养箱中放置 2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在 60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的培养基 6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达 70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培
养条件新配制的培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 T25 培养瓶 1：2 传代。
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备 DMEM 培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。 2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1） 冻存细胞的复苏：：
将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含 4-6mL 培养基的离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含 6-8ml 培养基的培养瓶（或皿）中 37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加入 0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1-2mL，T75 瓶 2-3mL），置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3-4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。
3.轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3-5min，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1：2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6-8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2~1:5 的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25 瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为 1×10^6~1×10^7个活细胞/ml.
2. 1000rpm 离心 3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每 1ml 冻存液含 1×10^6~1×10^7个活细胞/ml 分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80 度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项：
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
细胞培养操作：
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。
将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
c、按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
d、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；
a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
下列是公司正在出售的产品：
单羧酸转运蛋白3/4抗体 Anti-SLC16A3/MCT4 | FAM124B蛋白抗体 FAM124B |
紫外切除修复蛋白RAD23B单克隆抗体 RAD23B | EIF2B2蛋白抗体 EIF2B2 |
核糖体蛋白S6激酶1抗体 p70 S6 kinase beta | 人肠脂肪酸结合蛋白（IFABP）elisa检测试剂盒 |
人谷胱甘肽还原酶(GR)elisa分析检测试剂盒 | 小鼠真核翻译起始因子2α激酶3(EIF2αK3)elisa检测试剂盒 |
P27抗体/周期素依赖激酶抑制剂 CDKN1B/p27 KIP 1 | 转录因子E3 TFE3 |
CUE结构域蛋白1抗体 CUEDC1 | DNA复制解旋酶2样抗体 DNA2 |
GRELISAKit | 植物糖类总量铁氰化物比色法定量检测试剂盒 |
三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗体 ATAD3A | 细胞分化蛋白SEPT12抗体 Anti-SEPT12 |
足细胞特异蛋白抗体 Anti-PCX/PODXL | 大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)elisa检测试剂盒 |
磷酸化雷帕霉素靶蛋白复合体2抗体 Anti-Phospho-Rictor (Thr1135) | 3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1抗体 Anti-PDPK1 |
神经细胞PAS结构域蛋白4抗体 NPAS4 | 内质网脂质转运相关蛋白2抗体 Anti-SPFH2 |
锌指蛋白350/乳腺癌易感基因1结合蛋白抗体 Anti-ZNF350/ZBRK1 | NIT2蛋白抗体 NIT2 |
磷酸化氨基末端激酶1/2/3重组兔单克隆抗体 Phospho-JNK1/2/3(T183+T183+T221) | 大鼠KiSS-1受体(KISS1R)elisa分析检测试剂盒 |
磷酸化谷氨酸受体2B抗体 Phospho-NMDAR2B (Tyr1474) | 荷尔蒙敏感脂肪酶抗体 HSL/LIPE |
核受体0相关蛋白B家族2抗体 Anti-NR0B2/SHP | KISS1R ELISA kit |
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