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仪器信息网试剂标物生化试剂生物分子 PC12未分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞未分化

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上海抚生实业有限公司

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PC12未分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞未分化

价格：￥ 1500

品牌：抚生

供货周期：现货

货号：A01X1143

规格：1×106

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其他参数

种属:大鼠
产品分类:大鼠细胞系
细胞形态:成团状悬浮、半贴壁；
生长特性:贴壁/悬浮
用途:仅供科研研究实验

商品属性：

产品名称	PC12未分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞未分化	鉴定	STR鉴定
种属	大鼠	货号	A01X1143
温度	液氮	细胞形态	成团状悬浮、半贴壁；小的形状不规则细胞
英文名称	PC12:PC12	生长特性	贴壁/悬浮

细胞详情：

PC12未分化大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞未分化细胞别称：PC12未分化；大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞未分化

种属来源：大鼠

年龄性别：雄性

组织来源：肾上腺嗜铬细胞瘤

生长特性：贴壁/悬浮

细胞形态：成团状悬浮、半贴壁；小的形状不规则细胞

背景简介：PC-12(未分化)细胞是来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。PC-12(未分化)细胞表达神经生长因子(NGF)受体，NGF可诱导产生神经表型。PC-12(未分化)细胞不合成肾上腺素。

生物安全等级：

细胞规格：1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测：无

基因表达情况：

保藏机构：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心

培养基：1640+5%FBS+10%马血清+P/S

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

细胞系操作步骤：

(1) 细胞系培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃ CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。

(2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)

A液：用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。

B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。

分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。

(3) 吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。

(4) 转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。

(5) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。

(6) 瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。

细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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