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U118MG(U-118MG)人脑星形胶质母细胞瘤

U118MG(U-118MG)人脑星形胶质母细胞瘤

价格: 1500

品牌:抚生

供货周期: 现货

货号:A01X1004

规格:1×106

其他参数

  • 种属:人
  • 产品分类:人细胞系
  • 细胞形态:上皮细胞样
  • 生长特性:贴壁细胞
  • 用途:仅供科研研究实验

商品属性:
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产品名称

U118MG(U-118MG)人脑星形胶质母细胞瘤

鉴定

STR鉴定

种属

货号

A01X1004

温度

液氮

细胞形态

混合形

英文名称

U118MG(U-118MG):U118MGU118MG

生长特性

贴壁细胞

细胞详情:
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U118MG(U-118MG)人脑星形胶质母细胞瘤生长特性 贴壁细胞

细胞形态 混合形

冻存条件

冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度:液氮

培养方案A(默认)

生长培养基:

DMEM+10% FBS+1% P/S

培养条件:

气相:空气,95%;CO2,5%, 温度:37℃

推荐传代比例 1:3-1:4

推荐换液频率 2-3次/周

参考资料(来源文献)

背景描述 注意:据报道来自不同个体的胶质母细胞瘤细胞株U-118 MG(HTB-15)和U-138 MG(HTB-16)有着一致的VNTR和相近的STR模式。U-118 MG(HTB-15)和U-138 MG(HTB-16)细胞遗传学上很相似并有至少六个衍生标记染色体。这是1966-1969年间J·Ponten和其同事从恶性神经胶质瘤中构建的细胞株中的一株(其它包括HTB-14、HTB-16和HTB-17)。1987年,用BM-Cycline培养6周去除了U-118 MG(HTB-15)细胞支原体污染。

年龄(性别) 男性;50岁

组织来源 器官:大脑;肿瘤阶段:按2007年的标准归为IV期;疾病:星形胶质母细胞瘤

细胞类型 肿瘤细胞

肿瘤类型 胶质瘤细胞

生物安全等级 BSL-1

保藏机构 ATCC; HTB-15


细胞系操作步骤:

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(1) 细胞系培养:取6cm细胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液,37℃ CO2培养密度至40%~60%,密度过大,转染后不利筛选细胞。

(2) 转染液制备:在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)

A液:用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。

B液:用不含血清培养基稀释2ul脂质体。

分别将A液与B液轻弹混匀,静置5分钟。

(3) 吸取B液加入至A液中,轻弹混匀。室温中置10-15分钟。

(4) 转染准备:用1mL不含血清培养液漂洗两次,再加入4mL不含血清培养液。

(5) 转染:把A/B复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37℃温箱置6~24小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。

(6) 瞬时转染后,可在48h-72h细胞长满之后,提取细胞蛋白或者RNA,验证敲减/过表达效率。


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细胞处理:

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1) 冻存细胞的复苏:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 

3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例;

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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