TGIRT-III RTnase具有依赖于DNA/RNA杂交链的反转录酶活性,其具有极强的延伸性能,因此更易快速获得全长的cDNA能快速合成cDNA,该酶具有强的链转换活性(Switch)。因此,该酶可用于Template-Switching的RNA-seq,如tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆转录和加接头(TGIRT template-switching reaction,用于TGIRT-Seq)。除此外,其还可以利用RNA的5’端帽结构进行SMART建库(SMART-Seq)。该酶的反应温度为37-55°C,最佳反应温度为50°C。
应用
非编码RNA转录组测序
RIP-seq, HITS-CLIP, irCLIP and CRAC
通过高通量测序鉴定RNA碱基修饰
长cDNA的合成
储存
长期储存置于-20°C以下,可保存2年;短期使用置于4°C(3个月)保存。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性