Golden MLV反转录酶是海基在鼠源病毒反转录酶基础上进行改良而得的第四代反转录酶,通过定点突变去除了RNase H活性,从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选,使得其热稳定性更强,可耐受55℃高温反应。相比于传统42℃条件下反转录反应,采用55℃反转录可更好地打开RNA二级结构,从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量,因此能更好地提高后续检测的灵敏度。
单位定义
以poly(rA)为模板、oligo(dT)为引物,在37°C条件下,10分钟内催化1 nmol的dTTP掺入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为一个活性单位。
储存
-20°C可保存2年。
应用实例1:在以A3824-03或 A3828-03,用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果,可以看到检测反应<20min(达平台期)。
应用实例2: 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略,在反应结束后,倒置反应管,溶解管盖上染料后,阳性样本呈现出醒目的绿色,阴性表现出橙色,区分明显。且该方法不受样本类型限制,杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板,1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies,NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。
应用实例3:采用荧光酶活测定法在30℃和60℃条件下测定HotStart Bst 4.2,结果显示与未加入Aptamer的对照比较来看。HotStart Bst 4.2在30℃条件下酶活几乎无活性,而60℃条件下1min内酶活完全释放,恢复100%活性