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其他参数
核酸外切酶I(E.coli)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1352-1500U | 1500U | 核酸外切酶I(E.coli) |
P-PR1352-15KU | 15KU | 核酸外切酶I(E.coli) |
产品介绍:
描述:该酶具有从 3’-5’ 方向降解单链 DNA 的外切酶活性,能够逐步释放脱氧核糖核酸 5'单磷酸,并留下完整的 5'端二核苷酸。该酶来源于携带有 E. coli exo I 基因的质粒,经重组表达纯化而得。该酶多用于 PCR 扩增后降解消化引物,该酶对于双链 DNA 和磷酰或乙酰基团封闭的 3’OH 末端 DNA 链无活性。
应用:
从 PCR 混合物中去除引物PCR 产物测序之前用于在单管中使用大引物进行的PCR 诱变反应从核酸混合物中去除含有 3'羟基末端的单链 DNA检测含有 3'羟基末端的单链 DNA 的存在
储存:-20℃可保存 3 年。
活性定义:1 单位指在 37°C 条件下,30 分钟内催化释放10 nmol 的酸溶性核苷释放所需要的酶量。
注意事项:
(1)1×ExoI Buffer:67mM Glycine-KOH pH 9.5,6.7mMMgCl2,10mM 2-巯基乙醇。该酶在常规 PCR Buffer 中也具有活性。
(2)该酶的最佳反应温度为 37°C,80°C 20min 可失活。
(3)该酶不能切割双链 DNA,因此含有二级结构的单链DNA 需要变性后才能完全消化。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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