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其他参数
UNG (Uracil N-Glycosylase)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1353-1000U | 1000U | UNG (Uracil N-Glycosylase) |
P-PR1353-5000U | 5000U | UNG (Uracil N-Glycosylase) |
产品介绍:
描述:
尿嘧啶 DNA 糖基酶(Uracil N-Glycosylase,UNG)又名 Uracil-DNA Glycosylase, UDG, 来源于 E. coliuracil N-glycosylase 基因的重组表达,分子量为 26kDa。其可催化含尿嘧啶的单链和双链 DNA 释放游离尿嘧啶。
它对 RNA 无活性,主要应用于 PCR 扩增产物的防污染。
它的作用原理基于:如果在 PCR 反应中以 dUTP 替代dTTP掺入DNA 中,形成了含 dU 碱基的 PCR 扩增产物,该酶能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U 基的糖苷键,降解该 PCR 扩增产物。
活性定义:在标准 PCR 反应体系下,37℃条件下,1 小时降解 1μg 含 dU 碱基的单链 DNA 的酶量为 1 活性单位。
反应 Buffer:UNG与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。
酶储存液:20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50%Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
储存:置于-20°C 可保存 2 年,避免反复冻融。热失活:95°C,5min。
操作方法:
1.配制反应体系
Super Taq DNA Polymerase 0.5 μl
dNTP/dUTP Mixture 2~4 μl
10XHi PCR Buffer 5 μl
Uracil N-Glycosylase (5U/μl) 0.2~0.5 μl
Primers (10μM each ) 1 μl
Template DNA 10 ng-1 μg
DEPC-treated Water up to 50 μl
2. PCR 扩增循环参数
循环数 温度 时间
去污染 50°C 2min
热失活 95°C 5min
30-40 Cycles
95°C 20s
50~60°C 20s
72°C 1kb/1min
Last Cycle 72°C 5min
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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