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- 产品分类:核酸酶系列
- 包装:盒装
- 用途:用于科研实验
T5核酸外切酶
商品属性：
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1350-1000U | 1000U | T5核酸外切酶 |
P-PR1350-10KU | 10KU | T5核酸外切酶 |
产品介绍：
描述：
T5 核酸外切酶沿 5’-3’方向降解 DNA，它可降解双链DNA、单链 DNA 和缺刻的质粒 DNA。它既能从 5’-末端起始降解 DNA，也能从线性或环状双链 DNA 的切刻或缺口处起始降解 DNA，但不能降解超螺旋双链 DNA。基于以上特性，T5 核酸外切酶可应用于 Gibson 组装。
储存：-20℃可保存 3 年。
活性定义：1 单位指在 50 μl 反应体系，37°C 条件下，30分钟内能从双链 DNA 底物上催化产生 1 nmol 的酸可溶性脱氧核糖核苷酸所需要的酶量。
操作方法：
1.建立如下反应体系
模板 DNA 1 μg
10×T5 Exo Buffer 5 μl
T5 Exonuclease (10 U/μl) 1 μl
ddH2O upto 50 μl
2. 37°C，30min。
3. 加入 EDTA 至总浓度为 11mM，终止反应。
注意事项：
（1）1×T5 Exo Buffer：50mM KAc，20mM Tris-Ac pH 7.9，10mM Mg(Ac)2，1mM DTT。该酶在 PCR Buffer 中也具有活性。
（2）该酶的最佳反应温度为 37°C，在 50°C 也具有一定活性，因此可用于 Gibson 组装。
pcr相关试剂实验结果分析：
PCR实验结果的分析涉及多个方面，包括实验操作、试剂质量、实验条件等，这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：
循环次数过多：增加模板量减少循环次数，缩短退火时间及延伸时间，或改用两种温度的PCR循环，可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低：退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，过低的退火温度可能导致非特异性扩增，影响结果的准确性1。
电泳体系问题：包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题，这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题：运输储存不当可能引起试剂盒失效，试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板：使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，影响结果的解读1。
PCR假阴性结果：可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果，需要注意以下几点：
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析，可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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