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ssDNA/RNA环化连接酶

ssDNA/RNA环化连接酶

价格: 936

品牌:派瑞曼

供货周期: 现货

货号:P-PR1325

规格:2000U、20KU

其他参数

  • 产品分类:克隆相关
  • 包装:盒装
  • 用途:用于科研实验

ssDNA/RNA环化连接酶

商品属性:

货号

规格

产品名称

P-PR1325-2000U

2000U

ssDNA/RNA环化连接酶

P-PR1325-20KU

20KU

ssDNA/RNA环化连接酶

 产品介绍

描述: ssDNA/RNA CircLigase 为热稳定的 DNA/RNA 连接 酶,不依赖于 ATP,可催化单链 DNA 或单链 RNA 的分子内 环化。环化反应中,要求催化底物单链 DNA/RNA 具有 5’- 磷酸基团和 3’-OH 基团。对于大于 15nt 的单链底物,该酶 都能高效的连接。 

组分

活性定义:65°C 1h 条件下,催化 1pmol 5’-磷酸化的 ssDNA
底物环化,所需的酶量定义为 1Unit。
储存:-20℃可保存 3 年。
反应实例
1. 按以下组分配制反应液
CircLigase (100 U/μl) 1 μl
5’磷酸化 ssDNA/RNA 10-100 pmol
10×CircLigase Buffer 2 μl
50mM MnCl2 1 μl
ddH2O Up to 20 ul
65°C 孵育 1h 进行环化反应。
2. 失活反应
反应结束后,可加入终浓度 10mM EDTA 终止反应。或采用
加热方式 85℃ 10min 加热失活。

注意事项:

(1) 环化底物 ssDNA 或 RNA 必须带有 5’磷酸基团,3’端含有 OH。
(2) 环化体系中的 ATP 浓度高于 20μM 以上时会极大抑制环化效率,甚至导致环化失败。因此建议底物为纯化产物。
(3) 由于本酶提高了耐热性,在 65℃条件下进行连接反应,测试中 Betain 无益于连接效率提升。
(4) 本酶主要进行分子内环化连接,分子间的连接未检测到。
(5) 本酶对 ssDNA 和 RNA 的环化效率极高,多数情况下,90%以上的底物被环化。未被环化的 ssDNA 可通过加入 5U的 Exonuclease I,37°C 消化 15min 去除,以获得高纯度的环化 ssDNA。未环化的 ssRNA,将稍后给出去除方案。
(6) 本酶可以连接 15nt 以上的核苷酸,更长的产物连接参数, 将稍后给出测试报告及 protocol。
(7) 对于连接底物量较少的实验来讲,推荐缩小体系,而不是减少酶的用量。在小体系实验时注意体系的蒸发,可加入矿物油以防止蒸发。   

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pcr相关试剂实验结果分析:

PCR实验结果的分析涉及多个方面,‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等,‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:‌

循环次数过多:‌增加模板量减少循环次数,‌缩短退火时间及延伸时间,‌或改用两种温度的PCR循环,‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低:‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增,‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题:‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题,‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题:‌运输储存不当可能引起试剂盒失效,‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板:‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果:‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果,‌需要注意以下几点:‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染,‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析,‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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