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- 种属:人
- 产品分类:人细胞系
- 细胞形态:上皮细胞样
- 生长特性:贴壁生长
- 用途:仅供科研研究实验
细胞详情：
细胞特性
1）来源：人眼
2）形态：上皮细胞样，贴壁生长
3）含量：>1x106细胞数
4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5）用途：仅供科研使用。
运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备 DMEM/F-12培养基；优质胎牛血清，15%；双抗，1%。
2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例：
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项：
1、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2、建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
使用范围
本产品仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
商品属性：
产品名称 | HTMC人眼小梁网细胞 | 鉴定 | STR鉴定 |
种属 | 人 | 货号 | A01X778 |
温度 | 液氮 | 细胞形态 | 上皮细胞样 |
英文名称 | HTMC:HTMC | 生长特性 | 贴壁生长 |
细胞处理：
1） 冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
细胞系操作步骤：
(1) 细胞系培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃ CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。
(2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)
A液：用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。
B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。
分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。
(3) 吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
(4) 转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。
(5) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
(6) 瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。
公司正在出售的产品：
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A-204 [A204] (人横纹肌肉瘤细胞) | 毒碱O -乙酰基转移mei(CRAT/CAT1)ELISA试剂盒 |
H9 (人T淋巴细胞系) (STR鉴定正确) | 大鼠纤溶mei原激活物抑制因子(PAI)ELISA试剂盒 |
Bewo (人绒毛膜肿瘤细胞) (STR鉴定正确) | 鲑鱼传染性贫血病毒RT-PCR试剂盒 |
Ramos [RA 1] (人B淋巴细胞瘤细胞) (STR鉴定正确) | 羊肺腺瘤病毒RT-PCR试剂盒 |
Reh (人急性非B非T淋巴细胞白血病) (STR鉴定正确) | 绵羊疱疹病毒通用PCR检测试剂盒 |
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SW48 (人结肠腺癌细胞) | 弗莱克索病毒RT-PCR试剂盒 |
NCI-H441 (人肺腺癌细胞) | 脱氮副球菌PCR试剂盒 |
MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D] (人骨肉瘤细胞) (STR鉴定正确) | 消化链球菌通用PCR试剂盒 |
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Hs 578Bst (人正常乳腺细胞) | 肺炎支原体PCR检测试剂盒 |
BEAS-2B（人正常肺上皮细胞）（STR鉴定正确） | 腺病毒通用PCR检测试剂盒 |
MHCC97-L (人低转移肝癌细胞) | HTMC人眼小梁网细胞展开青霉PCR检测试剂盒 |
MEG-01 (人成巨核细胞白血病细胞)(STR鉴定正确) | mei原前体蛋白ELISA试剂盒 |
