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仪器信息网试剂标物生化试剂生物分子 CEM/C1人急性淋巴细胞白血病细胞

耗材通第 2 年

上海抚生实业有限公司

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CEM/C1人急性淋巴细胞白血病细胞

价格：￥ 1500

品牌：抚生

供货周期：现货

货号：A01X687

规格：1×106

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其他参数

种属:人
产品分类:人细胞系
细胞形态:淋巴母细胞样
生长特性:悬浮细胞
用途:仅供科研研究实验

细胞详情：

生长特性悬浮细胞

细胞形态淋巴母细胞样

生长培养基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

推荐传代比例 3×10^5-5×10^5cells/mL

推荐换液频率 2~3次/周

注意事项该细胞为悬浮细胞，请注意离心收集细胞悬液；请勿直接倒掉细胞培养液。

背景描述 CEM/C1细胞是人T细胞白血病细胞株CCRF-CEM [CCRF CEM]具有抗性的衍生细胞株；1991年，CEM/C1细胞选择并亚克隆了对CPT的抗性。CEM/C1细胞表现出对CPT类似物水溶性的托泊替康和非水溶性的9-氨基-CPT及10,11-亚甲二氧基-CPT具有交叉抗性。CEM/C1细胞对CPT的敏感性较母系CEM细胞低31倍；CEM/C1细胞表现非典型的多药抗性和转换拓补异构酶I催化活性，对CPT的抗性维持6个月以上。

年龄（性别）女；4岁

组织来源器官：外周血；疾病：急性淋巴细胞白血病；细胞类型：T淋巴母细胞

细胞类型肿瘤细胞

肿瘤类型白血病细胞

生物安全等级 1

倍增时间 ~26 hours

保藏机构 ATCC; CRL-2265

商品属性：

产品名称	CEM/C1人急性淋巴细胞白血病细胞	鉴定	STR鉴定
种属	人	货号	A01X687
温度	液氮	细胞形态	淋巴母细胞样
英文名称	CEM/C1:CEMC1	生长特性	悬浮细胞

细胞系操作步骤：

(1) 细胞系培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃ CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。

(2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)

A液：用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。

B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。

分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。

(3) 吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。

(4) 转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。

(5) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。

(6) 瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。

细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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