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- 产品分类:克隆载体及相关产品
- 包装:盒装
- 用途:用于科研实验
T4 DNA Ligase（T4连接酶）
商品属性：
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1231-500U | 500U | T4 DNA Ligase（T4连接酶） |
产品介绍：
产品概述：
在有Mg2+和ATP存在的条件下，T4 DNA Ligase能催化双链 DNA或RNA上相邻的5′-磷酸末端和3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化双链DNA的平末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻，但不能催化单链 DNA 之间的连接。
保存条件：-
20℃保存。
酶储存缓冲液：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5) ，50mM KCl，1mM DTT， 0.1mM EDTA，50% (v/v) glycerol。
5 × T4 DNA Ligase Buffer
250 mMTris-HCl (pH 7.5)， 50mM MgCl2，50mM DTT， 5mM ATP，连接促进剂。
来 源：纯化于携带T4 DNA ligase 基因 的E. coli 菌株。
抑制剂和热失活：
大于200mM的NaCl或KCl可以强烈抑制连接酶活性。65℃加热 10分钟或70℃加热5分钟即可失活。
单位定义：
在37℃，20分钟内交换1 nmole 的32PPi所需要的酶量定义为一个Weiss单位。本产品酶1U(Weiss Unit)相当于200个粘性末端单位。在T4 DNA 连接酶反应缓冲液中，16℃条件下，30分钟能够使50%的经Hind III消化的λDNA 片段连接所需要的酶量为一个粘性末端单位。
质量控制：
蓝白斑分析实验表明白斑数小于2%;过量T4 DNA Ligase 混合超螺旋质粒检测实验表明无核酸酶检出；SDS-PAGE检测重组蛋白纯度大于99%。
pcr相关试剂实验结果分析：
PCR实验结果的分析涉及多个方面，包括实验操作、试剂质量、实验条件等，这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：
循环次数过多：增加模板量减少循环次数，缩短退火时间及延伸时间，或改用两种温度的PCR循环，可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低：退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，过低的退火温度可能导致非特异性扩增，影响结果的准确性1。
电泳体系问题：包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题，这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题：运输储存不当可能引起试剂盒失效，试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板：使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，影响结果的解读1。
PCR假阴性结果：可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果，需要注意以下几点：
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析，可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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