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- 种属:人
- 英文名称:A375+EGFP
- 产品分类:人细胞系
- 细胞形态:成纤维细胞样
- 生长特性:贴壁细胞
- 用途:仅供科研研究实验
A375+EGFP人恶性黑色素瘤细胞+EGFP
货号 | 规格 | 种属 | 鉴定 |
A01X644 | 1×106 | 人 | STR鉴定 |
商品介绍：
产品名称 | A375+EGFP人恶性黑色素瘤细胞+EGFP |
产品别称 | |
生长特性 | 贴壁生长 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
冻存条件 | |
温度 | 液氮 |
商品介绍：
细胞介绍
A375源自一位54岁女性，是Giard DJ等人建立的一系列细胞株中的一株。该细胞可在免疫抑制小鼠上成瘤，在琼脂上形成克隆。
A375-EGFP是在 A375细胞上用慢病毒标记上EGFP，可以显示绿色荧光，带有嘌呤霉素抗性。
细胞特性
1） 来源：人黑色素瘤
2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长
3） 含量：>1x10⁶ 细胞数
4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5）用途：仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM基础培养基 87 %
优质胎牛血清 10 %
GlutaMAX-1谷an酰胺 1%
Sodium Pyruvate丙酮酸钠 1%
P/S青霉su-链霉su 1%
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 细胞处理：
1） 冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
细胞培养的步骤：
细胞培养前的准备：
细胞变质的征象包括核周出现颗粒、细胞与基质解离以及细胞质空泡形成。
这些变质征象可能为多种原因所致，例如：培养物污染、细胞系衰老或培养基中存在毒性物质，或者这些征象仅表明培养物需要更换培养基。
变质严重时将会成为不可逆的变化。
细胞培养通风橱的消毒及布局
保持细胞培养通风橱内的整洁有序，将所有物品置于直视范围内。
向放入通风橱内的所有物品喷洒70%乙醇，擦拭清洁进行消毒。
在通风橱中部开阔处放置细胞培养容器；移液器置于右前方易于取用；试剂和培养基置于右后方便于吸取；试管架置于中后部；小型容器置于左后部用于盛放废液。
培养瓶/皿等物品的无菌操作
细胞培养污染物主要分为两类：
化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。
生物污染物，如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。
可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术，降低污染发生的频率和严重程度。
细胞系要求及注意事项：
实验中建立细胞系有以下要求：
1、组织来源：
细胞供体所属物种，来自人体或者动物；
个体性别、年龄；取材的器官或组织。
如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病li号等。
2、细胞生物学检测：
了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。
如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。
3、培养条件和方法：
应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。
实验中建立细胞系需要注意事项：
1. 细胞的来源和健康程度需要保证，不能使用受到污染或者有疾病的细胞。
2. 实验室需要保持清洁和卫生，定期进行消毒，以避免细胞受到感染。
3. 细胞需要充足的营养和生长因子，以促进其生长和繁殖。
4. 温度和湿度的控制对于细胞的生长也非常重要，实验室需要有恒温恒湿设备。
5. 实验室需要配备各种安全设备，例如防火设备、急救箱等，保证实验的顺利进行和人员的安全。
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