找不到产品?留下需求帮您找
一键询价赛多利斯 Microsart ATMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart AMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart ATMP 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart® ATMP 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体校准试剂(DNA标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart® 细菌验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 细菌校准试剂(DNA标准品)
赛多利斯 | 一周
面议
其他参数
pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1322-20T | 20T | pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体 |
产品介绍:
描述:pUC57 Simple 通用克隆载体采用了 TOPO 酶连接技术,载体预先偶联上 TOPO 酶,当加入 PCR 扩增产物后,5 min 就可以完成连接反应,连接阳性率高。pUC57 Simple 通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点,便于后续亚克隆。该产 品适用于 Taq 酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的 PCR 产物的连接,载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。
注意:RTS DH5α 冻干感受态在未溶解状态下,可于-20℃长期保存(>2 年),已经溶解后,请-60℃以下保存(3 个月)。
操作方法:
1. PCR 产物的纯化
1.1 PCR 扩增完毕后,电泳检测产物,如无非特异性扩增、无引物二聚体、条带单一明亮,则可采用 PCR 产物纯化试剂
盒纯化后用于连接。产物不经纯化也可以进行连接,但效果稍差一些。
1.2 PCR 扩增完毕后,电泳检测产物,如有非特异性扩增条带或引物二聚体,则必须采用胶回收后用于连接。
1.3 PCR 扩增模板来源于 Amp 抗性质粒,则必须采用胶回收后用于连接。
2. PCR 用量和连接时间
PCR 产物大小 PCR 产物用量 载体用量 摩尔比 连接时间 阳性率
0.1~1kb 2~10ng 1 μl 1: 5~10 5~10min >95%
1~3kb 10~20ng 1 μl 1: 5~10 15~20min >90%
>3kb 5ng/kb 1 μl 1: 5~10 30min >85%
3. 连接反应
向 0.2 ml EP 管中依次加入如下试剂
成 分 用 量
PCR 产物 0.5~4 μl (用量参考上表)
pUC57 Simple Vector 1 μl
加无菌水至总体积为 5 μl
轻轻吹打混合均匀后,室温(25°C)孵育 5~30min,通常放置 10min。
关于 PCR 产物的用量说明:在 PCR 产物回收后(在无法进行 NanoDrop 测定浓度的情况下),按照一般的经验可估算产物
的用量,原则为:3 μl 回收产物在琼脂糖凝胶电泳后,可清晰判断的情况下,使用 0.5~1 μl 回收产物(约 5~15 ng)进行连
接即可。回收产物难以观察的情况下使用 4 μl 回收产物(约 5~10 ng)进行连接。使用过高量的 PCR 产物将会导致连接效
率低下,长斑数量和阳性率急剧下降。
主要特征
(1)快速连接,最快仅需 5min;(2)操作简单,仅需加入载体和片段即可;(3)无需蓝白斑筛选,阳性率高;(4)不包含
任何酶切位点,便于后续亚克隆(5)平末端和 A 尾产物通用。
注意:引物不能磷酸化。
测序引物
正向测序引物:M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’;
反向测序引物:M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’;
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
冰冻切片神经纤维荧光染色(PGP9.5)试剂盒 | 双重特异性磷酸酶27抗体 DUSP27 |
小鼠雌三醇(E3)elisa检测试剂盒 | 丝氨酸蛋白酶抑制剂SPINK6抗体 SPINK6 |
组织脂质过氧化物(MDA)活性TBARS比色法定量检测试剂盒 | PE-Cy7标记小鼠CD45单克隆抗体 mouse CD45/PE-Cy7 |
骨组织蛋白提取试剂盒100T | 磷酸鞘氨醇裂解酶1抗体 SGPL1 |
人白介素-1(IL-1)elisa检测试剂盒 | 绿色荧光蛋白抗体 GFP |
组织亚硝酸盐含量比色法定量检测试剂盒 | PE标记人CD86单克隆抗体 human CD86/PE |
磷酸化白细胞介素-10受体a抗体 phospho-IL10RA (Ser319 + Ser323) | FAM83H蛋白抗体 FAM83H |
磷酸化核仁磷酸蛋白抗体 Phospho-NPM (Thr95) | EXOC7蛋白抗体 EXOC7 |
锌指转录蛋白SALL2抗体 SALL2 | 大鼠抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体elisa分析检测试剂盒 |
嗅觉受体5D13抗体 OR5D13 | 蛋白磷酸酶3调节亚基B抗体 PPP3CB |
大肠癌肿瘤突变蛋白抗体 MCC | 猪热休克蛋白70(HSP-70)elisa检测试剂盒 |
线粒体核糖体蛋白L51抗体 MRPL51 | 香叶烯基转移酶1β抗体 PGGT1B |
饮料镁离子浓度酶反应光谱法定量检测试剂盒 | 核受体TR2抗体 NR2C1 |
山羊补体蛋白3(C3)elisa分析检测试剂盒 | 坏死因子配体超家族成员9抗体 TNFSF9 |
胱抑素C单克隆抗体(包被) Cystatin-C(8F14) | pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体丙型肝炎病毒NS5A/Hepatitis C Virus NS5抗体 HCV NS5a |
猪乙脑病毒(JEV)NS1蛋白抗体 JEV NS1 | 半乳糖凝集素7抗体 Galectin 7 |