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- 产品分类:克隆载体及相关产品
- 包装:盒装
- 用途:用于科研实验
pET-28a(+) Seamless Cloning Kit（线性化质粒）
商品属性：
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1227-20 μl | 20 μl | pET-28a(+) Seamless Cloning Kit（线性化质粒） |
产品介绍：
产品介绍：
pET-28a(+)载体为高水平的原核表达载体，在N端含有His-Tag, Thrombin（凝血酶）酶切位点，T7-Tag，在C端具有His-Tag。本产品提供pET-28a(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。
无缝克隆技术可在重组酶的作用下，只需一步反应，便可将片段克隆到任何载体中的任意位置，得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术，具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点，用于单个 DNA 片段的克隆，多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。
操作方法：
1. pET-28a(+)线性化载体使用方法：
(1) pET-28a(+)线性化载体当做克隆载体使用，可以在扩增PCR产物的
上游引物 5’端添加序列：GCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATG（需要5’端HIS标签时）
或者AACTTTAAGAAGGAGATATACCATG（不需要5’端HIS标签时）
下游引物 5’端添加序列：CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG（需要3’端HIS标签时）
或者CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGTCA（不需要3’端HIS标签时）
通过无缝克隆连接到pET-28a(+)中。
(1) 测序引物
T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
-2
pET-28a(+)线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体，图谱及多克隆位点见下图。
产品特点：
1. pET-28a载体为原核表达载体，具有N-His, N-Thrombin, N-T7和C-His。
2. pET-28a经EcoRⅠ酶切后的线性化载体，省时省力。
3. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。
4. 可以克隆长片段和多片段DNA。
5. 简单、快速、精确、定向克隆。
pcr相关试剂实验结果分析：
PCR实验结果的分析涉及多个方面，包括实验操作、试剂质量、实验条件等，这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：
循环次数过多：增加模板量减少循环次数，缩短退火时间及延伸时间，或改用两种温度的PCR循环，可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低：退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，过低的退火温度可能导致非特异性扩增，影响结果的准确性1。
电泳体系问题：包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题，这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题：运输储存不当可能引起试剂盒失效，试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板：使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，影响结果的解读1。
PCR假阴性结果：可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果，需要注意以下几点：
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析，可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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