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- 产品分类:核酸纯化
- 包装:盒装
- 用途:用于科研实验
TRzol LS（液体样本 RNA 提取试剂）
商品属性：
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1003-50ml×2 | 50ml×2 | TRzol LS（液体样本 RNA 提取试剂） |
产品介绍：
储存条件：
TRzol LS 在室温下能稳定保存 12 个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在 2-8°C 的环境下。
重要提示：
有毒物接触皮肤或者不慎吞服，会导致灼伤。一旦接触皮肤后立即以大量的洗涤剂和清水清洗。若感不适，看医生并寻求苯酚和其他成分的正确治疗方案。
产品介绍：
TRzol LS试剂是直接从细胞或组织中提取总RNA的试剂。它在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性。加入氯仿后离心，样品分成水样层、中间层和有机层。RNA存在于水样层中。收集上面的的水样层后，RNA可以通过异丙醇沉淀来回收。无论是人、动物、植物还是细菌，该方法对少量及大量的组织和细胞均有较好的分离效果。TRzol LS 试剂操作上的简单性允许同时处理多个样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRzol 抽提的总 RNA 能够避免DNA 和蛋白的污染，可用于 RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+筛选、体外翻译、RNA 酶保护分析和分子克隆。如果是用于 PCR，当两条引物位于单一外显子内时，建议用扩增级的DNase I 来处理抽提的总RNA。
操作方法：
1.样品预处理 a.生物液体 每0.25ml液体样品(血清，血浆等等)加入0.75ml TRzol LS，用加样枪吹打液体样品 几次以帮助裂解样品中细胞。每5~10×10 6个细胞至少加入0.75ml TRzol LS。对于含有高 污染物样品如全血样品，可以用灭菌水按照1：1比例稀释一倍后开始提取。TRzol LS 和液体样品的终体积比总是3：1。 b.组织 用glass或强力匀浆器搅匀组织样品，每50~100mg组织或者0.25ml组织悬液加 0.75ml的TRzol LS。一般50~100mg组织体积都要小于0.25ml，如果组织样品的体积小 于0.25ml，加入灭菌水将组织样品体积调整到0.25ml以保证体积比例是3：1。 c.单层生长的细胞 直接往直径3.5 cm的培养板中加入0.3ml-0.4ml的TRzol LS溶解细胞，用加样枪吹打 帮助充分裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRzol LS 量 （每10cm2加0.3-0.4ml）。不需要往裂解物里面加水，因为培养板中附着残留的培养液 已经充分稀释了TRzol LS 。 d.悬浮生长的细胞 通过离心来沉淀细胞。在TRzol LS试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每 5~10×10 6的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×10 7细菌加0.75ml的TRzol LS。和步骤 b 一样用灭菌水调节样品体积到0.25ml。在加入TRzol LS前应避免洗涤细胞，因为那 样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。 2.分离阶段 将匀浆样品在15-30°C条件下孵育5min以使核蛋白体完全分解。每0.75ml TRzol LS 加0.2ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15秒并将其在室温下孵育2~15 min。 在2~8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心15 min。离心后混合物分成三层： 下层苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。 水样层的容量大约为所加TRzol LS 容量的70%。
2.RNA 的沉淀 将水样层转移到一干净的试管中，如果希望分离DNA和蛋白，有机层和中间层同 样要予以保留。通过将水样层和异丙醇混合来沉淀RNA。每0.75ml TRzol LS对应0.5ml 异丙醇。将混合的样品在15-30°C条件下孵育10min并在2~8°C下以不超过12,000×g的离 心力高速冷冻离心10 min。RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后会形成一胶状片状 沉淀附着于试管壁和管底。
3.RNA 的漂洗 移去上层悬液。用75%的乙醇(RNase-Free water配制)洗涤RNA沉淀一次，每0.75ml 的TRzol LS至少加1ml的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2~8°C下以不超过7,500×g的 离心力高速冷冻离心5 min。
4.RNA 的再溶解 室温简单干燥 RNA 沉淀，不要在真空管里离心干燥 RNA。尤为重要的是，不能让 RNA 沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的 RNA 样品其 OD260 /OD280 比值<1.6 。用移液管分几次移取 RNase-Free water 或 0.5%SDS 溶液 (RNase-Free water 配制)来溶解RNA（如果RNA 以后要用于酶切反应时，避免使用SDS。） RNA 还能被 100%甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在-70°C。
注意事项：
1.从少量的组织(1~10mg)或细胞(10 2-10 4 个)中分离RNA 样品：往组织或细胞中加 入 800µl TRzol。待样品裂解后，加入氯仿并进行步骤 2 中的抽提操作。在用异丙醇沉 淀 RNA 之前，加入 5~10μg 无 RNA 酶的glycogen 作为水样层的载体。为降低其黏度 在加入氯仿前用 26 号注射器抽吸两次以切断基因组DNA。Glycogen 会留在水样层中 并和 RNA 共析出。在浓缩到 4mg/ml 之前它不会抑制逆转录反应第一链的合成也不会 抑制 PCR。
2.在匀浆化后和加入氯仿之前，样品可以在-60℃或者-70℃保存至少一个月。将 RNA 沉淀溶于 75%的乙醇在 2-8℃至少可以保存一周，在-5—-20℃下至少可保存一年。
3.用 TRzol LS 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通 风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无例外，室温保持在 15~30℃的条件下。
自备试剂：
氯仿 、 异丙醇、75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（将水加入 无 RNA 酶的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置过夜并高压灭菌）。0.5% SDS 溶液(RNase-Free water 配制)（可选）。
pcr相关试剂实验结果分析：
PCR实验结果的分析涉及多个方面，包括实验操作、试剂质量、实验条件等，这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：
循环次数过多：增加模板量减少循环次数，缩短退火时间及延伸时间，或改用两种温度的PCR循环，可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低：退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，过低的退火温度可能导致非特异性扩增，影响结果的准确性1。
电泳体系问题：包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题，这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题：运输储存不当可能引起试剂盒失效，试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板：使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，影响结果的解读1。
PCR假阴性结果：可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果，需要注意以下几点：
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析，可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品：
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小鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)elisa分析检测试剂盒 | 精子发生相关蛋白6抗体 |
小鼠凝血因子VIIIa轻链(F8aLC)elisa检测试剂盒 | SPATA6 |
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红细胞膜条带4.1蛋白抗体 EPB41 | MCM10 |
环指蛋白8抗体 RNF8 | 微小染色体维持缺陷蛋白10抗体 |
丝氨酸/精氨酸相关核基质蛋白4抗体 Anti-SRRM4 | Goat IgG / Cy3 |
中心粒周蛋白抗体 Anti-PCNT/Pericentrin | 按蚊硫酯包含蛋白-1抗体 Anti-Thioster-containing protein 1 |
前列腺特异膜抗原抗体 Anti-PMS/FOLH1/PMSA | Cy3标记羊IgG（型对照) |
肾功能相关抗原1抗体 KAAG1 | 视锥视杆相关蛋白CORD2抗体 CORD2/OTX3 |
G蛋白偶联受体167抗体 | 脆性X相关蛋白样2抗体 FXR2 |
GPCR MRGE/GPCR GPR167 | 锌指蛋白192抗体 ZFP192 |
超氧化物歧化酶2重组兔单克隆抗体 SOD2 | TRzol LS（液体样本 RNA 提取试剂）PE标记人CD30单克隆抗体 human CD30/PE |
锌指蛋白567抗体 ZNF567 | PE-Cy5标记小鼠CD86单克隆抗体 mouse CD86/PE-Cy5 |
