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其他参数
LAMP Loop DP-Probe (订制品)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1258-800Tx25μl | 800Tx25μl | LAMP Loop DP-Probe (订制品) |
产品介绍:
描述:
该 DP-Probe(DisPlaceable Probe)为链置换荧光探针,专用于LAMP 的荧光扩增。Loop DP-Probe 在搭配 HotStart Bst4.2 Basic 试剂时表现出极为出色的特异性,可以大幅降低非特异性扩增。LoopDP-Probe Pair 是将 Loop 引物进行改造(LF/B 任意一条均可),其由两条标记引物退火组成:荧光猝灭引物(5’IBFQ+Tail+Loop)和荧光报告引物(Tail 互补区+3’发光基团),其不发荧光。在 LAMP反应中 Loop 引物渗入到“哑铃”结构,由扩增返回“哑铃”延伸并置换游离的荧光报告引物,累积产生荧光信号。详细的原理可参考文献 PMID: 33626039。有经验的研究人员可根据参考文献自行制备 LAMP Loop DP-Probe Pair,经验不足的人员可委托 来制备, 提供三种荧光标记的探针。需要客户提供 Loop 序列,并指明需要的荧光标记(FAM/JOE/ROX)。
eLAMP DP-Probe 试剂的开发简述:
1. 引物的粗筛选
无论是变色、试纸条、荧光法 eLAMP 试剂的开发,前期的测试过程, 推荐采用价格较低的液体 HotStart Bst4.2 SYBR Green试剂(进行粗筛选。通常筛选的引物为 3-5 组。10xeLAMP Mix:FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each.测试样品:10e3、100、25、10Copies/管,NTC(16-32 重复)
2.5xBst4.2 SYBR Green Mix 10 μl
10x ePrimer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
模板 DNA/RNA X μlddH2O 到总体积 25 μl置于 70°C 反应 45min,1min 收集一次荧光信号。
良好的引物组具有 以 下 特 性 (Ct) :
10e3copies =5-10min; 25copies <15min;10Copies<20min, NTC 均>40min. 以上实验需要反复确认,以确
保核心引物的工作效率,否则重新筛选,再进行后续的其它测试。
2. Loop DP-Probe Pair 的制备
根据上述引物组的筛选情况,选取最佳引物组。在此基础上改造LF 或 LB,改造哪一条效果更佳,必须经过测试。下面以改造 LF为例进行说明。 通常提供 25x 的 LF DP-Probe Pair(或自行制备)。
注意:
(1)测试试剂更改为 HotStart Bst4.2 Basic 试剂。
(2)10xeLAMP Mix 引物浓度有调整。
10xeLAMP Mix:FIP/BIP=8 μM each; LB=4 μM;LF=3 μM.
2.5xBst4.2 Basic Mix 10 μl
10x ePrimer Mix 2.5 μl
25x LF DP-Probe Pair 1 μl
HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 25 μl
置于 70°C 反应 45min,1min 收集一次荧光信号(注意根据探针荧光标记,选取正确的荧光通道)。与 SYBR Green 结果相比来看,时间会滞后 1-3min。NTC 的控制会明显提升。
此时可进一步做后续的其它项目测试。
3. 如有试剂冻干制备的需求可采用如下几种方案:
(1)(液体试剂)+PrimerMix 自行冻干(专业人员使用)。
(2)PrimerMix+(引物冻干剂)自行冻干,加入 (冻干球)。
(3)(HotStart Bst4.2),全程自行冻干(专业人员使用)。
(4)委托 进行全体系冻干。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
小鼠孕酮(PROG)elisa检测试剂盒 | 细胞基质金属(MMP-13)活性比色法定量检测试剂盒 |
大鼠卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)elisa检测试剂盒 | 人γ干扰素诱导单核细胞因子(MIG/CXCL9)elisa分析检测试剂盒 |
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小鼠凋亡相关因子(Fas/Apo-1/CD95)elisa检测试剂盒 | 小鼠细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)elisa检测试剂盒 |
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磷酸化核糖体蛋白S6激酶家族RSK3抗体 | 稻叶O1血清型霍乱弧菌抗体 Vibrio cholerae O1 serotype Ogawa |
Phospho-RSK3 (Thr353 + Thr356) | 锌指蛋白845抗体 ZNF845 |
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性发育转录因子蛋白DMO抗体 Dmrta1 | PREX1蛋白抗体 PREX1 |