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其他参数
HotStart Bst 4.2 SYBR Green Mix(可冻干)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1252-200Tx25μl | 200Tx25μl | HotStart Bst 4.2 SYBR Green Mix(可冻干) |
产品介绍:
描述:
本品为 LAMP 荧光检测专用的试剂,2.5xBst4.2SYBR Green Mix 包含了 Helicaser、dNTP、Mg2+、SYBRGreen 染料、反应缓冲盐、冻干赋形剂和稳定剂。HotStartBst4.2 DNA/RNA 聚合酶为单独的组分。本品不仅可作为常规检测试剂,对于具有冻干经验的研究者,本品还直接进行后续冻干,无需再加入任何其它辅料。
Bst4.2 具有以下性能:
(1)Bst 4.2 全系包含热启动Aptamer,该配体确保酶在<30℃时,酶活封闭效率>95%,在>60℃时 1min 内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系,并大幅降低了低温条件下的非特异扩增;
(2)反应温度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高扩增特异性,并使得粗样品核酸释放更加充分;
(3)全系包含 Helicaser,因此,允许在不使用 F3/B3 引物的情况下进行 LAMP 扩增(easy LAMP),并允许 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增,并使得扩增均一性大幅提升。
特殊说明:
(1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 扩增时的推荐反应温度为 65-70℃,最佳反应温度为 70℃。因此其可完全替代 的 Bst4.0 系列,用于标准 LAMP 的扩增。
(2) 由于 Helicaser 的反应温度为 70℃,因此在进行 eLAMP 扩增时,反应温度为 70℃。
(3) 制品中包含高浓度的盐组分,使用时做好个人防护,防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入,一旦接触或吸入,请用大量的清水冲洗。
(4)防止气溶胶污染,尽可能进行分区操作。
1. 标准 LAMP 和 eLAMP 扩增的区别本试剂既可以用于标准 LAMP 扩增,也可以用于 eLAMP扩增。
1.1 10x 标准 LAMP Primer MixFIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 10xeLAMP Primer Mix
FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each
注意:eLAMP(easy LAMP)为去除 F3/B3 引物的方法,为 Bst4.2系列专用的使用策略,对于大多数引物组,在 Helicaser 的加持下,扩增速度几乎不受影响。如引物扩增效率低,可提高 FIP/BIP 浓度到 12~16uM。
1.3 扩增温度不同标准 LAMP 扩增 eLAMP 扩增65-70°C 均可 70°C 反应
2. 配制 LAMP 反应体系2.5xBst4.2 SYBR Green Mix 10 μl
10x Primer Mix 2.5 μlHotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到总体积 25 μl反应体系配好后,置于 65-70°C 反应 20~30min,1min 收集一次荧光信号。读取扩增曲线进行阴性和阳性判读。
3. 试剂的冻干反应(仅限专业人员)
本试剂可供具有冻干经验的人员直接进行后续冻干,试剂的配方对冻干条件不苛刻。但对于不同的用户来讲,由于冻干形式、冻干体积、上机量、冻干容器、冻干磨具等因素存在差异,以下程序仅供参考。进一步的程序优化均需根据具体情况自行调整。对于非专业人员来讲,请直接采购 的冻干制品,或委托订制。
2.5xBst4.2 SYBR Green Mix 10 μl
25xPrimer Mix 1 μl
HotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl
Total 12 μl
制品成型后的冻干程序:
-50℃预冻 10min; -50℃ 4-8h(真空段);-50℃升温到 25℃(每小时升温 5℃);25℃ 2h; 25℃恒温。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
乳制品总乳酸比色法定量检测试剂盒 | 细胞中心粒蛋白抗体 POC5 |
小鼠P-选择素糖蛋白配体1(PSGL-1)elisa检测试剂盒 | 线粒体核糖体蛋白L2抗体 MRPL2 |
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