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其他参数
HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead(紫绿变色冻干球)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1256-100Tx25μl | 100Tx25μl | HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead(紫绿变色冻干球) |
产品介绍:
描述:
该制品为全体系冻干微球制品,包含了 HotStartBst4.2 DNA/RNA 聚合酶、Helicaser、dNTP、Mg2+、反应缓冲、L-HNB 变色指示剂(Leuco-HNB, 隐色 HNB 染料),其它稳定剂。
Bst4.2 具有以下性能:
(1)Bst 4.2 全系包含热启动
Aptamer,该配体确保酶在<30℃时,酶活封闭效率>95%,在>60℃时 1min 内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系,并大幅降低了低温条件下的非特异扩增;
(2)反应温度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高扩增特异性,并使得粗样品核酸释放更加充分;
(3)全系包含 Helicaser,因此,允许在不使用 F3/B3 引物的情况进行 LAMP 扩增(easy LAMP),并允许 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增,并使得扩增均一性大幅提升。制品中的 L-HNB 染料在反应起始前与 Mg2+结合产生深紫罗兰色,随着 LAMP 反应的进行,产生的 PPi(无机焦磷酸盐)结合体系中的 Mg2+,使得 L-HNB 显示出淡绿色。(L-HNB-Mg2+复合物) -> (PPi-Mg2+)+ (L-HNB)深紫罗兰色 淡绿色
注意事项:
特殊说明:
(1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 扩增时的推荐反应温度为 65-70℃,最佳反应温度为 70℃。因此其可完全替代 的 Bst4.0 系列,用于标准 LAMP的扩增。
(2) 由于 Helicaser 的反应温度为 70℃,因此在进行eLAMP 扩增时,反应温度为 70℃。
(3)制品中包含高浓度的盐组分,使用时做好个人防护,防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入,一旦接触或吸入,请用大量的清水洗。
(4)防止气溶胶污染,尽可能进行分区操作。
1. 标准 LAMP 和 eLAMP 扩增的区别本试剂既可以用于标准 LAMP 扩增,也可以用于 eLAMP扩增。
1.1 10x 标准 LAMP Primer MixFIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 10xeLAMP Primer MixFIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each
注意:eLAMP(easy LAMP)为去除 F3/B3 引物的方法,为 Bst4.2 系列专用的使用策略,对于大多数引物组,在Helicaser 的加持下,扩增度几乎不受影响。如引物扩增效率低,可提高 FIP/BIP 浓度到 12~16 μM。
1.3 扩增温度不同标准 LAMP 扩增 eLAMP 扩增65-70°C 均可 70°C 反应
2. 配制 LAMP 反应体系HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead 1 个
10x Primer Mix 2.5 μl
模板 DNA/RNA X μlddH2O 到总体积 25 μl反应体系配好后,置于 65-70°C 反应 20~30min,反应完毕后观察颜色,紫色为阴性,绿色为阳扩增。
注意事项:
(1)本制品在 1x 浓度情况下,对如下试剂的耐受度,Tris-HCl(pH8.0)≦10 mM; NaOH≦1 mM; Tween20%≦1%; EDTA(pH8.0) ≦20 μM; 肝素≦0.5 IU/ml。
(2)L-HNB 是还原状态下的染料,任何强氧化剂(H2O2、次氯酸钠等)均会破坏 L-HNB 的结构,从而直接导致试剂变为深蓝绿色。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
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