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- 产品分类:核酸纯化
- 包装:盒装
- 用途:用于科研实验
GST Magnetic Beads
商品属性：
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1064-1ml（20mg/ml） | 1ml（20mg/ml） | GST Magnetic Beads |
产品介绍：
产品介绍：
GST Magnetic Beads 是1μm大小均匀的，表面包覆有高密度谷胱甘肽的二氧化硅基质超顺磁磁珠。这种磁珠是特定设计主要用于免疫沉淀反应，或者快速，一步法纯化带有 GST-标签的重组蛋白，纯化过程大约需要15-25分钟。
产品特点：
·快捷，简单的一步法高通量操作，无需纯化柱或过滤器，或重复移液、离心等操作（图 1）
·高结合能力
·极低的非特异性结合率
·成本低：只有市场同类磁珠产品价格的一半
·对样本体积要求低，便于自动化操作
注意事项：
设计一个用于纯化 DNA 或 RNA 的通用操作流程相对简单，因为核酸具有相对一致
的生化特性。然而，设计一个用于蛋白质纯化的通用试剂盒是非常困难的，因为每种蛋白
质具有不同的组成和结构。为了获得最佳实验结果，每个用户必须确定需要纯化的融合蛋
白的最佳纯化条件。
在纯化 GST 标记的融合蛋白之前，应将所需使用的试剂温度调剂到室温。
A．细胞提取物的制备
1.将细胞培养液以 10000 x g 离心 6 分钟，完全去除上清后收集细胞体，并在-80℃下冷冻
放置 1 小时。
2. 在冰块上解冻细胞，并且每 50 毫升细胞培养物用 3ml 的 1x Binding/ Washing Buffer 重
新悬浮细胞。在冰上通过短暂的超声破碎细胞，直到样品不再粘稠。同时避免样品被加热。
注意：GST 标签与磁珠的结合不受 1% Triton X-100、1% Tween-20、1% CTAB、10 mM DTT、
0.03%SDS 或 0.1% NP-40 的影响。而且，这些化学物质可能会减少非特异性结合概率。
3. 以 10000 x g 离心6分钟，小心地将上清液转移到干净的预冷管中，并将沉淀按照每50ml
培养物加入 3ml 1x Binding /Wshing 缓冲液方式重新悬浮。
4. 分别从上清液和沉淀液中吸取 10μl 样品，加入等体积的 2x SDS 加样缓冲液， 煮沸 5
分钟，使用 SDS-PAGE 测定融合蛋白的总量和溶解度。
注意：如果 GST 融合蛋白形成包涵体（不溶性蛋白），则包涵体必须在纯化前适当溶解和
重新折叠。
B．在自然条件下纯化重组 GST 标签融合蛋白
1. 震荡装有磁珠的试剂瓶，直到磁珠完全悬浮，然后将适量的磁珠转移到新的试管中。
注意：这一点非常重要，用户应根据粗样品中 GST 标记融合蛋白的数量，根据经验确定
用于每次纯化的最佳磁珠数量。过多的磁珠会导致更高的背景；磁珠太少会导致产量下降。
所以，我们建议从每 0.1mg 重组 GST 标签融合蛋白加 100μl 完全悬浮磁珠开始纯化。
2. 将试管置于磁力分离器中，等待 2-3 分钟，直到上清液完全澄清。吸出上清液，从磁力
分离器上取下管，用 4 倍体积的 1x Binding /Wshing 缓冲液重新悬浮磁珠。
3.重复步骤 2 一次。
4. 将试管放入磁力分离器中，待上清液澄清后丢弃上清液。用 1 倍体积的 1xBinding
/Wshing 缓冲液重新悬浮磁珠。
5. 将制备好的细胞提取物与磁珠混合，通过多次颠倒充分混合，并在连续旋转的情况下混
匀 10-20 分钟。将试管放入磁力分离器中，保存一小部分上清液并丢弃剩余部分。
注意：保留一份上清液供进一步分析，因为某些蛋白质可能不会与磁珠结合。
6. 通过添加 8 倍体积的 1x Binding /Wshing 缓冲液清洗磁珠，并通过移液器多次吹吸重新
悬浮磁珠。再次将试管放入磁力分离器中，然后吸出试管上清液。
7. 用 8 倍体积的 1x Binding /Wshing 缓冲液充分清洗磁珠，直到洗脱液在 280 nm 处的
吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。（注意：这一步对于获得高纯度蛋白质非常重要。）
8. 从磁力分离器上取下试管，向试管中加入所需体积的 1x Elution Buffer 缓冲液，从磁珠
上洗脱下结合蛋白。通过多次吹吸，将磁珠重新充分悬浮，并在室温下涡旋震荡 5 分钟充
分混匀。将管放入磁力分离器中，小心地将上清液转移到干净的试管中。
9.重复步骤 8 一次。
10. 分别从上述步骤5 中吸取的上清液和步骤 8 中吸取的蛋白洗脱液中吸取 10-20μl 液体，
并进行 SDS-PAGE 分析，以确认目标蛋白的存在。
C．磁珠的再生和储存
注意：如果目标 GST 融合蛋白相同，则磁珠可重复使用三次而无需再生。但是，如果目
标 GST 融合蛋白不同或磁珠结合能力下降，则必须根据以下条件再生磁珠：
1. 使用 10 倍体积的再生缓冲液 I (50 mM Tris-HCl，pH 8.0, 0.5 M NaCl)清洗磁珠，并用上
述的磁力分离器分离上清液。
2. 使用 10 倍体积的再生缓冲液 II (100 mM 醋酸钠，pH 4.5, 0.5 M NaCl)清洗磁珠，并用
磁力分离器分离上清液。
3. 通过添加 10 倍体积的 1x Binding /Wshing 缓冲液，快速平衡磁珠。对于长期储存，磁
珠应储存在 4ºC 的 20%乙醇中。
D．常见问题
问题 1：纯化的融合蛋白产率低或无法检测到。
可能原因：
1. 重组蛋白形成包涵体
建议： ⑴在 14℃环境培养菌体。
⑵将 IPTG 的最终浓度降低至 0.1mM 以进行蛋白质诱导。 ⑶减少蛋白诱导时间。 ⑷纯化前正确破碎包涵体。
2. 该融合蛋白不含有活性 GST 标签
建议：尝试使用其他融合蛋白的纯化方式，例如 His 标签。重新编码目标蛋白的纯化标签。
3.过度的超声破碎，使蛋白变性。 建议：尽量使用温和的超声波条件或其他方法，如溶菌
酶。
4.融合蛋白不与磁珠结合
建议： ⑴在细胞裂解之前，在结合缓冲液中添加最终浓度为 5 mM 的 DTT。 ⑵ 检查结合缓冲液的 pH 值（pH 值应为 6.5-8.0）。
5. 融合蛋白不能有效地从磁珠中洗脱。
建议： ⑴提高洗脱时间。 ⑵将洗脱缓冲液中的谷胱甘肽浓度增加至 15mM 或更高。（请检查最终 pH 值，必要时
进行调整。）
⑶在不增加谷胱甘肽浓度的情况下，将洗脱缓冲液的 pH 值调整至 8.0-9.0。 ⑷在洗脱缓冲液中添加最终浓度为 0.1% Triton X-100 或最终浓度为 0.1-0.2 M NaCl。
问题 2. 在洗脱蛋白中观察到多条带
可能原因：
1.融合蛋白降解
建议： ⑴添加适量的蛋白酶抑制剂。 ⑵使用蛋白酶缺陷表达宿主。
2. 一些宿主蛋白，如伴侣蛋白，可能与融合蛋白相互作用。
建议： ⑴在洗脱缓冲液中加入最终浓度为 5 mM DTT。 ⑵纯化前，在 37℃下将重组蛋白溶液在伴侣蛋白缓冲液（2 mM ATP、10 mM MgSO4、50 mM Tris-HCl）中温浴 10 min。
3. 过度超声处理会导致一些蛋白质与融合蛋白结合。
建议：使用温和的超声条件或其他溶解方法。
pcr相关试剂实验结果分析：
PCR实验结果的分析涉及多个方面，包括实验操作、试剂质量、实验条件等，这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：
循环次数过多：增加模板量减少循环次数，缩短退火时间及延伸时间，或改用两种温度的PCR循环，可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低：退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，过低的退火温度可能导致非特异性扩增，影响结果的准确性1。
电泳体系问题：包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题，这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题：运输储存不当可能引起试剂盒失效，试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板：使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，影响结果的解读1。
PCR假阴性结果：可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果，需要注意以下几点：
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析，可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品：
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SARS病毒核衣壳蛋白单克隆抗体 SARS-CoV Nucleocapsid | HOXC6 |
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减数分裂源蛋白1抗体 RMND1 | 金属蛋白酶组织抑制因子-1单克隆抗体 TIMP-1 |
卵巢滤泡抗体 | G蛋白结合蛋白RAB相互作用蛋白抗体 RAB11FIP1 |
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