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其他参数
Extreme Thermostable Rnase HII(极耐热Rnase HII)
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1372-200U | 200U | Extreme Thermostable Rnase HII(极耐热Rnase HII) |
产品介绍:
描述:
该 RNase H2 是来源于极端耐热的菌株的内源性核酸内切酶,它识别 RNA/DNA 杂交链并切割 RNA 链,其对单链 RNA 切割活性极低,且对 dsDNA、ssDNA 无切割活性。该酶在 DNA/RNA duplex 的单核糖核苷酸残基
处从 5’端进行切割,切割后产生一个 5′端磷酸基团和一个3′端羟基。该 RNase H2 酶在 60-70°C 具有最佳活性,在 50°C 到 75°C 间均具有活性,但其在室温下活性非常低。该酶极度耐热,在 95°C 加热 30min 后仍保留全部活性,因此其与大多数的 PCR 缓冲体系兼容,可用于 RnaseHII 依赖性 PCR(rhPCR)等实验。
储存:-20°C 可保存 2 年。
单位定义:一个单位是指在 60°C 下,15 分钟切割 1nmol含有单个 RNA 的嵌合 DNA/RNA 杂交双链体底物所需的酶量。
本品为高浓度制品:使用时通常需要先用 15%甘油稀释到 2U/μl 后使用。
10XET RNase H2 Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl,1% Tween20, 200ug/ml BSA, 50mM Mg2+, pH8.5.
操作方法:
DNA/RNA 杂交链 10-200pmol
10XET RNase H2 Buffer 2 μl
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
ddH2O Up to 20 μl
50-70°C 反应 15min。
使用方法(二)-rhPCR 扩增
10XPCR Buffer 2 μl
10μM Blocked PrimerF 0.4 μl
10μM Blocked PrimerR 0.4 μl
Taq DNA Polymerase 0.5Unit
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
DNA 模板 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
反应:95°C 1min,循环 45 次(95°C 10s,60°C 30s)。
注意事项:
1. 该酶在 50-75℃均有活性,其用量可根据不同的应用进行调节,该酶在室温 25 度情况下活性极低。
2.该酶用于 rhPCR(依赖于 Rnase H2 的 PCR )时,需要使用 3′ 端带封闭基团的 DNA 引物(Blocked 引物)。引物 3’端可以采用 C3 Spacer 或 NH2 封闭,3’末端第 5位为单碱基的 RNA 碱基。
3. 该酶与绝大多数的 PCR 缓冲体系兼容,最佳 mg2+浓度 2~3mM。
4. 该酶极其耐热,95℃30min 活性无显著降低,故不可通过热失活,0.1% SDS 可将其失活。
5. 在 rhPCR 中推荐的使用浓度为 10~50mU/μl。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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