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- 产品分类:核酸酶系列
- 包装:盒装
- 用途:用于科研实验
Extreme Thermostable Rnase HII（极耐热Rnase HII）
商品属性：
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1372-200U | 200U | Extreme Thermostable Rnase HII（极耐热Rnase HII） |
产品介绍：
描述：
该 RNase H2 是来源于极端耐热的菌株的内源性核酸内切酶，它识别 RNA/DNA 杂交链并切割 RNA 链，其对单链 RNA 切割活性极低，且对 dsDNA、ssDNA 无切割活性。该酶在 DNA/RNA duplex 的单核糖核苷酸残基
处从 5’端进行切割，切割后产生一个 5′端磷酸基团和一个3′端羟基。该 RNase H2 酶在 60-70°C 具有最佳活性，在 50°C 到 75°C 间均具有活性，但其在室温下活性非常低。该酶极度耐热，在 95°C 加热 30min 后仍保留全部活性，因此其与大多数的 PCR 缓冲体系兼容，可用于 RnaseHII 依赖性 PCR（rhPCR）等实验。
储存：-20°C 可保存 2 年。
单位定义：一个单位是指在 60°C 下，15 分钟切割 1nmol含有单个 RNA 的嵌合 DNA/RNA 杂交双链体底物所需的酶量。
本品为高浓度制品：使用时通常需要先用 15%甘油稀释到 2U/μl 后使用。
10XET RNase H2 Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl,1% Tween20, 200ug/ml BSA, 50mM Mg2+, pH8.5.
操作方法：
DNA/RNA 杂交链 10-200pmol
10XET RNase H2 Buffer 2 μl
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
ddH2O Up to 20 μl
50-70°C 反应 15min。
使用方法（二）-rhPCR 扩增
10XPCR Buffer 2 μl
10μM Blocked PrimerF 0.4 μl
10μM Blocked PrimerR 0.4 μl
Taq DNA Polymerase 0.5Unit
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
DNA 模板 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
反应：95°C 1min，循环 45 次（95°C 10s，60°C 30s）。
注意事项：
1. 该酶在 50-75℃均有活性，其用量可根据不同的应用进行调节，该酶在室温 25 度情况下活性极低。
2.该酶用于 rhPCR（依赖于 Rnase H2 的 PCR ）时，需要使用 3′ 端带封闭基团的 DNA 引物（Blocked 引物）。引物 3’端可以采用 C3 Spacer 或 NH2 封闭，3’末端第 5位为单碱基的 RNA 碱基。
3. 该酶与绝大多数的 PCR 缓冲体系兼容，最佳 mg2+浓度 2~3mM。
4. 该酶极其耐热，95℃30min 活性无显著降低，故不可通过热失活，0.1% SDS 可将其失活。
5. 在 rhPCR 中推荐的使用浓度为 10~50mU/μl。
pcr相关试剂实验结果分析：
PCR实验结果的分析涉及多个方面，包括实验操作、试剂质量、实验条件等，这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：
循环次数过多：增加模板量减少循环次数，缩短退火时间及延伸时间，或改用两种温度的PCR循环，可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低：退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，过低的退火温度可能导致非特异性扩增，影响结果的准确性1。
电泳体系问题：包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题，这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题：运输储存不当可能引起试剂盒失效，试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板：使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，影响结果的解读1。
PCR假阴性结果：可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果，需要注意以下几点：
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析，可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，从而提高实验结果的准确性和可靠性。
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