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- 产品分类:核酸纯化
- 包装:盒装
- 用途:用于科研实验
EASYspin 全血 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I )
商品属性：
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1005-50 次 | 50 次 | EASYspin 全血 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I ) |
产品介绍：
保存条件：本试剂盒在规定保存温度储存 12 个月不影响使用效果。
产品介绍：
红细胞裂解液选择性裂解红细胞,然后独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解白细胞 和灭活细胞 RNA 酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA 在高离序盐状态下选择性吸 附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液 将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的 RNase free H2O 将 RNA 从硅基质膜上洗 脱。
自备试剂：乙醇，β-巯基乙醇
操作方法：
使用前将 10×RLB（RNase-free）用 DEPC 处理水稀释到 1×。
操作前在裂解液 RLT 中加入β-巯基乙醇至终浓度 1%，如 1 ml RLT 中加入 10 μl β- 巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的 RLT 4℃可放置一个月。
1.在适合大小的RNase free离心管中加入1体积（<1.5 ml）加入各种抗凝剂新鲜血液 (颠倒混匀后)和 3 体积的 1×RLB（RNase free），颠倒混匀，可轻弹管壁,确保混匀。
2.室温放置 10 min（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。如果 RNA 降解严重,可在冰上裂解,但是时间可长一些以充分裂解。
3.12,000 rpm 离心 20 sec，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清（注意不要吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团。如发现红细胞大量残留可重复 2，3 步骤。
4.涡旋或者轻弹管壁将白细胞沉淀完全松散重悬，加 350 μl（<0.5 ml 全血或<2×10 6白 细胞）或者 600 μl（0.5-1.5 ml 全血或 2×10 6-1×10 7 白细胞）裂解液 RLT，吹打混匀 后用手剧烈振荡 20 sec，充分裂解。
5.用带钝针头的一次性 1 ml(配 0.9 mm 针头) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到满 意匀浆结果(或者电动匀浆 30 sec)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高产量。
6.较精确估计裂解物体积，加入等体积的 70%乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!）， 此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
7.将混合物(每次小于 700 μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中（吸附柱放入 收集管中），12,000 rpm 离心 30-60 sec，弃掉废液。
8.加 350 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，12,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。将吸 附柱 RA 放回收集管中。
9.DNase I 工作液的配制：取 10 μl DNase I 储存液放入新的 RNase-free 离心管中，加入 70 μl RDD 溶液，轻柔混匀。
10.向吸附柱 RA 中央加入 80 μl DNase I 工作液，室温放置 15 min（一般情况下室温放 置可得到较好的消化效果，如果室温效果不佳可选择在 37℃放置 15 min）。
11.加 350 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 30 sec，12,000 rpm 离心 30 sec，弃掉废液。将 吸附柱 RA 放回收集管中。
12.加入 500 μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心 30 sec， 弃掉废液。加入 500 μl 漂洗液 RW，重复一遍。
13.将吸附柱 RA 放回空收集管中，12,000 rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数分 钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
14.取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中 间部位加 30-50 μl RNase free H2O（事先可在 65℃水浴中加热效果更好），室温放置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min。
注意事项：
1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
2.需要自备一次性注射器。
3.裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4.关于DNA的微量残留：
由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的 DNA 残留（一般电泳 EB 染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大，如果要进行严格的 mRNA 表达量分析如荧光定量 PCR，我们建议在进
行模板和引物的选择时：
⑴选用跨内含子的引物，这样 DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
⑵选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
5.RNA 纯度及浓度检测：
完整性：RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件：胶浓度 1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150V，15 min)检测完整性。由于细胞中 70%-80%的 RNA 为 rRNA，电泳后 UV下应能看到非常明显的 rRNA 条带。动物 rRNA 大小分别约为 5 kb 和 2 kb，分别相当于 28S 和 18S rRNA。动物 RNA 样品中最大 rRNA 亮度应为次大 rRNA 亮度的 1.5-2.0倍，否则表示 RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的 RNA，OD260/OD280 读数（10 mMTris, pH7.5）在 1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的 pH 值影响。同一个 RNA 样品，假定在 10 mM Tris，pH7.5 溶液中测出的 OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在 1.5-1.9 之间，但这并不表示 RNA 不纯。
浓度：取一定量的 RNA 提取物，用 RNase-free 水稀释 n 倍，用 RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行 OD260，OD280测定，按照以下公式进行 RNA 浓度的计算：
终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数 n)×40
pcr相关试剂实验结果分析：
PCR实验结果的分析涉及多个方面，包括实验操作、试剂质量、实验条件等，这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：
循环次数过多：增加模板量减少循环次数，缩短退火时间及延伸时间，或改用两种温度的PCR循环，可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低：退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，过低的退火温度可能导致非特异性扩增，影响结果的准确性1。
电泳体系问题：包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题，这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题：运输储存不当可能引起试剂盒失效，试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板：使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，影响结果的解读1。
PCR假阴性结果：可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果，需要注意以下几点：
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染，以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析，可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品：
M. scrofulaceum RFLP基因分析试剂盒 | 小鼠肌腱蛋白X(TNX)elisa检测试剂盒 |
人B因子（BF）elisa检测试剂盒 | 大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)elisa检测试剂盒 |
小鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)elisa分析检测试剂盒 | 全组织a-染色试剂盒 |
大鼠CDCP1 elisa检测试剂盒 | 核转录因子YA抗体 |
大鼠抗肌内膜抗体IgA(EMA IgA)elisa检测试剂盒 | NFYA |
胰中和液 | 人白介素1β(IL-1β)elisa分析检测试剂盒 |
G蛋白偶联受体70抗体 GPR70 | GLT8D1 |
HER4抗体 ErbB4 | 糖基转移酶8结构域1抗体 |
酪氨酸酶抗体 Anti-Tyrosinase | Rabbit Anti-Goat IgG H&L / Cy7 |
嘌呤ATP受体抗体 Anti-P2Y2 | 大肠杆菌志贺样Ⅱ型突变体（O139菌型）抗体 Anti-Shiga-like toxin IIe variant subunit A |
丘脑分泌素受体抗体（食欲素受体） Anti-CD200R/Orexin receptor | Cy7标记的兔抗羊IgG H&L |
纺锤体样蛋白3抗体 SPIN3 | 富含亮氨酸蛋白LRP130抗体 LRP130/LRPPRC |
FAM25A蛋白抗体 | AF750标记的过氧化酶活化增生受体γ抗体 PPAR Gamma, Alexa Fluor 750 conjugated |
FAM25A | 结肠癌抗原3抗体 SDCCAG3 |
AF680标记的I型胶原单克隆抗体 Collagen I, Alexa Fluor 680 conjugated | EASYspin 全血 RNA 快速提取试剂盒 (DNase I )载脂蛋白L4抗体 APOL4 |
精子形成相关凋亡蛋白2抗体 TSARG2/SPATA4 | 有丝分裂原和应激活化型蛋白激酶1抗体 MSK1 |
