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5min极速RNA提取试剂盒
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1307-50T | 50T | 5min极速RNA提取试剂盒 |
产品介绍:
描述:
本试剂盒采用独特的裂解液,可快速可靠的从细胞、动物组织、植物组织、病毒液样本、抗凝全血、培养细菌中纯化出高纯度的总 RNA。该试剂盒是目前国际上操作步骤最少、用时最短的 RNA 提取试剂盒(最快 5 分钟)。应用本试剂盒提取的 RNA 可直接用于反转录、基因克隆、定量检测、文库构建、杂交等多种分子生物学实验。
注意事项:
(1) 本试剂盒中的 Washing Buffer 中已经加乙醇,无需单独添加。
(2) RNA LB1 和 RNA BB2 均具有腐蚀性,注意防护。操作方法
(1)裂解/上柱(1.5ml EP 管中处理)培养细胞:胰酶消化完毕后,离心收集细胞沉淀,用 20~30μl 水或PBS 重悬细胞沉淀(务必重悬充分)。加入 120μl RNA LB1 漩涡混匀 30s(有未溶解的细胞团块,用枪头吹打,助溶解),加入 500μlRNA BB2 上下颠倒混合均匀,倒入吸附柱中。13000rpm 离心 30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
组织样品----采用研钵进行研磨:用液氮研磨粉碎组织样本,将研磨粉碎的样品加入到 200μl RNA LB1 中,漩涡混合均匀 1min(有块状组织未溶解的,要使用枪头吹打,助消化),加入 500μl RNABB2 上下颠倒混合均匀,13000rpm 离心 15s。将上清倒入吸附柱中(动作需轻柔,勿将未消化的组织块倒入吸附柱),13000rpm 离心 30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
组织样品----采用钢珠进行研磨:将组织样品加入到 300μl RNALB1 中(1.5ml EP 管),并加入几粒钢珠,置于组织研磨仪中,研磨 1~2min。向研磨后的匀浆液中加入 750μl RNA BB2,漩涡混匀5s,13000rpm 离心 1min。用 1ml 吸头吸取 750μl 上清液到吸附柱中。13000rpm 离心 30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。注意:植物组织的匀浆效果通常较动物组织差一些,所以一般推荐采用液氮条件下研钵来研磨。在采用钢珠研磨的条件下务必将组织研磨粉碎,否则会导致产率降低。病毒液 /体液 /血清 /血浆:吸取 150μl 病毒液/体液样品到加入到120μl RNA LB1 中,漩涡混合均匀 30s。直接加入 500μl RNA BB2中,漩涡混合均匀 15s。倒入吸附柱中,13000rpm 离心 30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
培养细菌:收集菌体后,用 20~30μl 水重悬菌体(务必重悬充分),加入 120μl RNA LB1 漩涡混匀 30s,加入 500μl RNA BB2 上下颠倒混合均匀,倒入吸附柱中。13000rpm 离心 30s,倒掉废液,进行后续洗涤/洗脱步骤。
(2) 洗涤和洗脱
向吸附柱中加入 500μl Washing Buffer,13000rpm 离心 15s。重复此步骤一次。 将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心1min,将残留的乙醇彻底甩干。 将吸附柱芯放入到 2mL NucleaseFree 收集管中,向吸附柱芯中加入 20~50μl Nuclease Free H2O,室温放置 1min,13,000rpm 离心 1min,洗脱液即为提取的 RNA,冷冻保存。
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
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