现有冻存方法存在的问题:
1、DMSO对细胞存在一定的毒性,用量受到限制,降低或者不使用DMSO,寻找其它替代物是最好的选择。但是目前,该技术领域还未发现冻存保护效果能与DMSO媲美的物质,因此,联合其它成分,形成新的配方,降低DMSO的含量就成了较为现实的选择。
2、血清,即使是纯化得到的白蛋白,由于其动物来源的特性,会极大增加带来病毒等感染物质的可能。而且,血清来源受限,价格昂贵,所以其使用也必然会受到越来越多的限制。因此,寻找替代血清的非渗透性保护剂也显得尤为必要。
3、目前,最成熟和最稳定的冻存细胞技术是将加有保护剂的细胞悬液置于-196℃液氮中,这样可以使细胞暂时脱离生长状态而保持细胞的特性,在需要的时候经过复苏程序,使得细胞重新生长增殖以用于实验。细胞储存在-196℃液氮中,理论上储存时间是无限的,但是液氮冻存步骤繁琐,需要经过程序降温,如先将冷冻管置于4℃冰箱10分钟,然后移至-20℃冰箱30分钟,再移至-80℃冰箱保存16-18个小时(或隔夜),最后才移至液氮罐中进行长期的储存。(其中需要注意的是-20℃条件下不可超过1个小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量的死亡。)
赛尔瑞成科学家团队在细胞冻存领域进行了大量研究工作,早在 2015年即自主研发了“CRD10无血清细胞冻存液”(货号:CF0101) 。产品获得了广大科研工作者的喜爱。
赛尔瑞成最新发明了一种新的冻存液体系: CRD5无 血清低DMSO 细 胞冻存液(货号:CF0201;专利号:ZL 2020 1 0307890.6) ,不仅可以省却对血清的使用,而且还显著降低了DMSO的用量。同时,本专利细胞冻存液冻存的细胞悬液可以直接放置于-80℃冰箱,既不需要繁琐的程序降温或采用程序降温仪,更不需要放置在-196℃液氮中,节省了大量时间和精力。该细胞冻存液通用于人和各种动物细胞株。特别配方(主要成分为5% DMSO和氨基酸)具有有效提高细胞冻存活率和复苏活力。不含血清及动物来源性蛋白,能减少各类病毒、霉菌和支原体等的污染,确保冻存细胞安全。既适用于一般培养细胞的冻存,也适用于无血清培养细胞和蛋白表达细胞的冻存。
产品特点:
1. 高安全性,不含血清及动物源成分,病毒、霉菌和支原体等污染可能性低,各批产品之间有更高的产品质量一致性。
2. 低DMSO,DMSO的含量为5%(v/v),极大降低了对细胞潜在的毒性作用。
3. 细胞存活率高,无批次差异。
4. 完全冻存液配方,可直接使用,方便简捷。
5. 可直接存放于-80℃冰箱冻存,无需经过费时的程序降温过程(省时、省力、省钱),不需要采用程序降温仪,更不需要放置在-196℃液氮。
6. 可原位冻存,比如杂交瘤细胞的亚克隆,可以大规模减少工作量,避免污染。
冻存效果对比:
图1. 小鼠成纤维细胞3T3细胞复苏后细胞状态对比图
对照B:存活率89% 本产品:存活率97%
图2. 人胚肾细胞293E细胞复苏后细胞状态对比图
对照B:存活率86% 本产品:存活率93%
注:对照A: DMEM培养基+10%血清+10%DMSO,液氮冻存;
对照B:CRD10无血清细胞冻存液(DMSO 10% v/v);
本 品:CRD5无血清低DMSO细胞冻存液(DMSO 5% v/v)。
产品目录
货号 | 产品名称 | 规格 | 目录价格 |
CF0201 | CRD5无血清低DMSO细胞冻存液 | 100 mL | 780 |
CF0202 | CRD5无血清低DMSO细胞冻存液 | 500 mL | 3380 |
附: 通用细胞冻存液,CRD10无血清细胞冻存液、CRD5无血清低DMSO细胞冻存液的比较
通用细胞冻存液 | CRD10 无血清细胞冻存液 | CRD5无血清低 DMSO 细胞冻存液 | |
主要成份 | 含血清、含 DMSO | 不含血清,含 DMSO 10% | 不含血清,低 DMSO 5% |
细胞毒性 | 高 | 高 | 低 |
安全性 | 低 动物来源病毒、霉菌和支原体等污染的风险偏高 | 高 无动物来源病毒、霉菌和支原体等污染的风险 | 高 无动物来源病毒、霉菌和支原体等污染的风险 |
冻存细胞种类 | 适合含血清细胞冻存 | 通用型 适合各类细胞冻存 | 通用型 适合各类细胞冻存 |
无血清培养细胞生长状态 | 易改变易由悬浮状态回复贴壁状态 | 保持悬浮培养状态 | 保持悬浮培养状态 |
批次差异 | 批次差异大 | 无批次差异 | 无批次差异 |
操作方法 | 步骤繁琐 需程序降温冻存 | 简单快捷 一步冻存 -80 ℃冰箱 | 简单快捷 一步冻存 -80 ℃冰箱 |
保存设备 | 要求高(液氮) | 要求低( -80℃ 冰箱) | 要求低( -80℃ 冰箱) |
微量冻存 | 细胞易死亡,存活率偏低 | 细胞存活率高 | 细胞存活率高 |
原位冻存 | 不可行 | 可行,且方便快捷 如 : 杂交瘤细胞孔板冻存 | 可行,且方便快捷 如 : 杂交瘤细胞孔板冻存 |