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细胞介绍
RLE-6TN(大鼠肺上皮 T 抗原阴性)细胞系来源于使用链霉蛋白酶溶液进行气道灌注从 56 天大的雄性 F344 大鼠中分离的肺泡 II 型细胞。SV40-T 抗原的表达通过核免疫染色和 PCR 为阴性,表明这些细胞是通过自发永生化获得的。
该细胞系表现出肺泡 II 型细胞的特征,例如含脂质包涵体(膦 3R 染色和电子显微镜检查)和细胞角蛋白 8 和 19 的表达;细胞不表达碱性磷酸酶活性。据报道,RLE-6TN 细胞表达的几种趋化细胞因子与肺泡 II 型细胞的原代培养物相似。在裸鼠中不会致瘤。
细胞特性
1) 来源:褐家鼠 肺
2) 形态:肺泡细胞,II型 上皮样 贴壁生长
3) 含量:>1x106 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途:仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备F12培养基;添加ITS(10ug/mL胰岛素;转铁蛋白5.5ug/mL; 5ng/mL硒)1%,EGF 5ng/mL,优质胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。