找不到产品?留下需求帮您找
一键询价赛多利斯 Microsart ATMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart AMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart ATMP 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart® ATMP 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体校准试剂(DNA标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart® 细菌验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 细菌校准试剂(DNA标准品)
赛多利斯 | 一周
面议
价格: ¥ 798
品牌:翌圣生物
供货周期: 现货
货号:11141ES60
规格:100T
Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。与Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase相比,Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,非常适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。
该预混液包含5×gDNA digester Mix和4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus。5×gDNA digester Mix可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus 含有逆转录反应所需的所有组分(Buffer,dNTP,Hifair® Ⅲ Reverse Transcriptase,RNase inhibitor,Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix),只需加入RNA模板和 RNase-free H2O即可进行逆转录反应,并同时终止gDNA digester的作用,保证cDNA的完整性。
该产品适用于两步法RT-qPCR检测,针对qPCR进行特别优化,比例优化的Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,并具有相同的逆转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR® Green和探针法qPCR,可以根据实验目的,选择Hieff UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix,Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。
产品组分
组分编号 | 组分名称 | 产品编号/规格 | |
11141ES10 (10 T) | 11141ES60 (100 T) | ||
11141-A | RNase-free H2O | 1 mL | 2×1 mL |
11141-B | 5×gDNA digester Mix | 30 μL | 320 μL |
11141-C | 4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus | 50 μL | 500 μL |
【注】:4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。
产品应用
适用于两步法RT-qPCR。
运输和保存方法
冰袋运输。-20℃保存。有效期18个月。
注意事项
1)5×gDNA digester Mix和4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心收集到反应管底部,并用移液枪轻轻吸打充分混匀后,准确吸取;
2)如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 μL),请确保RNA是溶于水中而不是TE中,因为TE会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制;
3)可以不经过基因组去除步骤,直接用4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus进行逆转录,这样所得到的结果会与使用Hifair® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix (Cat No.11137ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11137ES中的Hifair® Ⅲ SuperMix配套使用,因其不含终止gDNA digester反应的成分,会影响反转录和后续的qPCR实验;
4)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;
5)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作;
6)本产品仅作科研用途!
第一链cDNA合成操作步骤
1. 残留基因组DNA去除
在RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
组分 | 使用量 |
RNase-free H2O | To 15 μL |
5×gDNA digester Mix | 3 μL |
Total RNA or mRNA | 10 pg -5 μg* 10 pg-500 ng* |
【注】:* 20 μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1 μg。如果目的基因的表达丰度低,最多投入5 μg Total RNA,否则RNA投入量过高,可能会超过后续定量PCR的线性范围。
2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)
在第1步的反应管中直接加入4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus,用移液器轻轻吹打混匀。
组分 | 使用量 |
第1步的反应液 | 15 μL |
4×Hifair® Ⅲ SuperMix plus | 5 μL |
3.逆转录标准程序设置
温度 | 时间 |
25℃ | 5 min |
55℃ | 15 min |
85℃ | 5 min |
【注】:逆转录温度:推荐使用55℃。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到60℃。
逆转录快速程序设置
温度 | 时间 |
55℃ | 15 min |
85℃ | 5 sec |
【注】:逆转录快速程序适用于中低GC含量(≤55%)或者简单模板。
※ 逆转录产物可立即用于qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。
HB221101