1. 使用专业分离机全自动标记和分离细胞。
2.手动磁性贴标。
[使用专业分离机全自动细胞标记和分离]
▲ 有关使用Pro分离器的说明，请参阅用户手册。
▲ 所有缓冲温度应为≥10°C。
▲ 将试管放置在以下冷藏架位置：
位置 A = 样品，位置 B = 负分数，位置 C = 正分数
1.打开仪器进行自动初始化。
2. 转到试剂菜单并选择读取试剂。使用专业分离器上的条形码扫描仪扫描每个试剂瓶的二维条形码。将试剂放在试剂架上的适当位置。
3. 将样品和收集管放入冷藏架。
4. 转到“分离”菜单，从“标记”子菜单中选择每个样品的试剂名称（将自动选择正确的标记、分离和洗涤方案）。
5. 在“体积”子菜单中输入样品体积。按回车键。
6. 选择运行。
7.在位置B =负级分处收集富集的NK细胞级分。
[随后使用专业分离机进行自动细胞分离]
▲ 有关使用Pro分离器的说明，请参阅用户手册。
▲ 所有缓冲温度应为≥10°C。
▲ 将试管放置在以下冷藏架位置：
位置 A = 样品，位置 B = 负分数，位置 C = 正分数。
8. 准备并灌注仪器。
9. 按照用户手册中的说明进行操作。
10.建议使用“耗尽”程序。在位置B =负级分处收集富集的NK细胞。
[手动磁性标签]
▲ 快速工作，保持细胞低温，并使用预冷溶液（2-8°C）。
▲ 下面给出的磁性标记体积最多为10⁷个总细胞。使用较少的单元格时，请使用指示的相同体积。当使用较高的细胞数量时，请相应地扩大所有试剂体积和总体积。
▲ 为了获得最佳性能，在贴标前获得单细胞悬浮液非常重要。
1.准备细胞并确定细胞数量。
2. 将细胞沉淀重悬于每 40⁷ 个总细胞的 10 μL 缓冲液中。
3. 每 10⁷ 个总细胞加入 10 μL NK 细胞生物素抗体混合物。
4.充分混合，在冰箱（5-2°C）中孵育8分钟。
5. 每 30⁷ 个总细胞加入 10 μL 缓冲液。
6. 每 20⁷ 个总细胞加入 10 μL NK 细胞微珠混合物。
7.充分混合，在冰箱（10-2°C）中孵育8分钟。
8.进行后续的磁性细胞分离。
▲ 注意：磁分离至少需要 500 μL。如有必要，向细胞悬液中添加缓冲液。
[后续手动细胞分离]
▲ 始终等到色谱柱储液槽为空后再进行下一步。
9. 将色谱柱置于合适的分离器的磁场中。
10.用适量的缓冲液冲洗制备色谱柱：
质谱：500 微升 LS：3 毫升
11.将细胞悬液涂在色谱柱上。收集含有未标记细胞的流通，代表富集的NK细胞。
12.用适量的缓冲液洗涤色谱柱。收集通过并与步骤11中的流出物结合的未标记细胞。
质谱：500 微升 LS：3 毫升
13. （可选）从分离器中取出色谱柱并将其放在合适的收集管上。将适量的缓冲液移液到色谱柱上。通过将柱塞牢固地推入色谱柱中，立即冲洗出磁性标记的非NK细胞。
质谱：1 毫升 LS：5 毫升
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