ATCC 39920 马链球菌兽疫亚种

                          ATCC 39920 马链球菌兽疫亚种 百欧博伟生物

马链球菌兽疫亚种（S.equi subsp. zooepidimicus） 旧称兽疫链球菌，常存在于皮肤、呼吸道、扁桃体及生殖道，可致各种家畜的炎症和败血症。其中以马最易感，引起子宫炎、流产或不孕症、牛的乳腺炎，对羊和猪及禽类可引起败血性链球菌病。自然康复后可形成免疫力，国内研制的链球菌弱毒苗有一定的免疫效果。

菌种简介

平台编号：Bio-67404

规格：Freeze-Dried

拉丁属名：Streptococcus Equi Subsp. Zooepidemicus

菌株名称：马链球菌兽疫亚种

用途：ATCC原装进口

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

详细描述

Streptococcus equi subsp. zooepidemicus Farrow and Collins 拉丁名

(ATCC 39920) 统一编号

Strain Designations 菌株别名 HA-116

Application 用途 Produces hyaluronic acid Production of high molecular weight hyaluronic acid

Isolation 分离基物 Nitrosoguanidine-induced mutant of clinical isolate HA-100

Type Strain 模式菌株 no

Biosafety Level 生物安全等级 2

Product Format 提供形式 freeze-dried

Storage Conditions 保藏条件

Frozen 冷冻物: -80℃ or colder

Freeze-Dried 冻干物: 2℃ to 8℃

Live Culture 活物: See Propagation Section

Preceptrol no

Type Strain 模式菌株 no

Medium 培养基 ATCC Medium 44: Brain Heart Infusion Agar/Broth

ATCC Medium 260: Trypticase soy agar/broth with defibrinated sheep blood

Growth Conditions 生长条件

Temperature 培养温度: 37℃

Atmosphere 需氧情况: Aerobic

Name of Depositor 寄存人 Biotechnology General Corp.

U.S. Patent Number 4,780,414

Disclosure This material is cited in a US or other Patent and may not be used to infringe the claims. Depending on the wishes of the Depositor, ATCC may be required to inform the Patent Depositor of the party to which the material was furnished.

Isolation Nitrosoguanidine-induced mutant of clinical isolate HA-100

References 参考文献 Nimrod A, et al. Method of producing high molecular weight sodium hyallronate by fermentation of Streptococcus. US Patent 4,780,414 dated Oct 25 1988 Nimrod A, et al. High molecular weight sodium hyaluronate. US Patent 4,784,990 dated Nov 15 1988

医用价值

马链球菌兽疫亚种（Streptococcus equi ssp. zooepidemicus, SEZ）属于兰氏分群的C群β溶血链球菌，能够感染多种动物及人类。在我国，该菌是猪链球菌病的主要病原，能引起猪的脑膜炎、败血症、关节炎、心内膜炎及突发性死亡，并对相关从业人员的健康构成潜在威胁。尽管目前国内市场上已有多种预防C群链球菌疫苗，但其免疫保护效果往往不能令人满意，因此安全、高效的新型疫苗仍有待研究。本实验室已采用免疫蛋白组学方法筛选马链球菌兽疫亚种ATCC35246株细胞壁相关蛋白，并成功鉴定出10种免疫原性蛋白。多数蛋白在马链球菌兽疫亚种上未曾见报道，其是否为保护性抗原仍需进一步鉴定。本文根据GenBank上已公布的这10种蛋白的基因序列，分析选择免疫原性较好部分的基因序列设计并合成引物。以马链球菌兽疫亚种ATCC35246株基因组DNA为模板，通过PCR技术，扩增出目的基因并定向克隆至表达载体pET-32a(+)、pET-28a(+)中，然后将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)。通过PCR鉴定和重组质粒双 切鉴定后，挑取阳性克隆菌进行IPTG诱导表达。经SDS-PAGE鉴定，目的蛋白均获得良好的表达，大小与预期值一致。Western-blot显示，融合蛋白均可被猪源ATCC35236株康复血清识别，表明其具有天然蛋白的部分抗原性。重组融合蛋白经亲和层析纯化后，与等量ISA206佐剂进行乳化。通过皮下免疫途径分组免疫ICR小鼠，并以ATCC35246全菌灭活苗和PBS作为对照组。用间接ELISA 法检测小鼠血清IgG 抗体，并通过体外调理吞噬试验测定抗血清的调理活性。结果表明重组蛋白免疫小鼠后能有效产生免疫应答，血清中抗体水平有明显升高，且有良好的补体依赖的调理吞噬功能。二免后以5LD50 ATCC35246 强毒株进行腹腔攻击，结果显示试验组存活率优于PBS对照组，其中免疫EF-G融合蛋白组小鼠的保护率达到50%，免疫TF、TK、GAPDH、PPH融合蛋白组均达到37.5%，表明原核表达产物免疫ICR小鼠，可使其对同源菌株攻击产生一定的保护作用，在亚单位疫苗研制中具有应用价值。

菌种的使用范围

(1)合成培养基。合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。这种培养基的化学成分清楚,酿酒酵母菌组成成分精确,重复性强,而且微生物在这类培养基中生长较慢。如高氏一号合成培养基、察氏(Czapek)培养基等。

(2)天然培养基。由天然物质制成,如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤,前者用于培养霉菌,后者用于培养细菌。这类培养基的化学成分很不恒定,也难以确定,但配制方便,营养丰富,培养效果好,所以常被采用。

(3)半合成培养基。在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类,或在合成培养基的基础上添加某些天然成分,如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。

菌种的培养

1、菌种是指食用菌菌丝体及其生长基质组成的繁殖材料。菌种分为母种(一级种)、原种(二级种)和栽培种(三级种)三级。工业发酵的有用菌种,其筛选步骤包括菌种分离、初筛和复筛。

2、挑选具有某种能力的有用菌种,也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和质量的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。

3、种子制备包括孢子制备和菌丝体制备 菌种制备。

4、保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃(或较高温度)下培养5~7天(或较长时间。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子(对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基)。

5、将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。

6、如果有些生产菌种不产孢子,如赤霉素产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米浆),及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐的种子应生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。

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