其他参数
Alexa Fluor 荧光素抗体标记试剂盒
Alexa Fluor-Antibody conjugation Kit
产品介绍:
免疫荧光标记技术(immunofluorescence technique)是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素,当与 其相对应的抗原或抗体起反应时,在形成的复合物上就带有一定量的荧光素,在荧光显微镜下就可以看见 发出荧光的抗原抗体结合部位,检测出抗原或抗体。该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。
荧光素标记抗体简称荧光抗体(FA),是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流式细胞学、病毒学及 自身抗体的临床免疫诊断之中的特异、灵敏、定性和定位相结合的免疫化学试剂。用于标记的抗体,要求 是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取 IgG、 IgM 后再作标记。
本试剂盒中的荧光素采用高质量进口的 Alexa Fluor 荧光素,AF 荧光素标记抗体的原理是利用 Alexa Fluor 上的 NHS 基团和抗体上游离的-NH2 发生化学形成 AF-Ab 结合物,即荧光抗体。一般一个 IgG 分子 可结合 2-8 个分子的 Alexa Fluor 荧光素分子。
规格:可标记 100ug-1mg 抗体
保存条件:2-8℃避光保存,一年有效。勿冻存。
试剂盒组份:
标记流程图示:
注意事项:
1. 试剂盒保存在 2-8℃, 勿冻存。
2. 试剂盒组份在运输过程中可能造成颠倒,会使液体或干粉试剂沾到管壁或瓶盖上。使用前请离心处理,以使附着管壁或瓶盖的液体或干粉试剂沉积到管底。
3. Alexa Fluor 需现用现配,溶解后的 Alexa Fluor 不能长期保存。
4. 纯化柱中的缓冲液含有毒性成分叠氮化钠(NaN3),使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。
5. DMSO 属微毒类,对人体皮肤有渗透性,对眼又刺激作用,使用时避免与皮肤,眼睛和黏膜接触。
6. 标记前抗体的透析,浓缩和浓度测定等操作都会造成抗体量的损失,因此标记前准备抗体时需根据具体情况考虑最适宜的抗体量。
标记操作步骤:
1. 抗体准备
1.1. 建议抗体浓度在 1-2mg/ml 之间。
1.2. 抗体中不要含有 BSA 或其它蛋白质成分。
1.3. 抗体缓冲液中不要含有氨基的盐(如:Tris,NaN3等),pH 在 6.5-8.5 为宜。
2. 抗体标记
2.1. 取出 Alexa Fluor 离心数秒,将管中 Alexa Fluor 干粉甩至管底;
2.2. 管中加入 50ul DMSO 用移液枪反复吹打或 vortex 混匀至 Alexa Fluor 完全溶解;
2.3. 抗体中加入适量调整缓冲液(每 100ul 抗体中加入 10ul 调整缓冲液);
2.4. 将溶解后的 Alexa Fluor 加入抗体中(每 100ug 抗体中加入 4.0ul Alexa Fluor), 用移液枪反复吹打或 vortex 混匀。
2.5. 将抗体-Alexa Fluor 混合物置水平摇床或旋转混匀仪,在摇动状态下室温避光(反应管可包裹锡箔纸)反应 1h。
注: 如果需要较高 F/P 值,可适当延长抗体和 Alexa Fluor 偶联时间。
3. 游离 Alexa Fluor 去除
3.1. 取出纯化柱,将纯化柱 3000rpm 离心 2min。
3.2. 暂时保留收集管中的缓冲液。
3.3. 将纯化柱移至新的收集管上,吸取抗体-Alexa Fluor 偶联物置纯化柱中填料的表面。如果样品体积小于 50ul,应先用 3.2 保留的缓冲液将液体量补足 50ul。上样体积最大不要超过 100ul。
3.4. 待样品渗入填料后,3000rpm 离心 2min。
3.5. 将抗体-Alexa Fluor 标记物 4℃避光保存待用。
4. 标记抗体保存
4.1. 标记抗体可 4℃避光保存,也可以根据需要选择加入 BSA、防腐剂、甘油等成分保证产品稳定。
4.2. 推荐保存液:0.01M TBS(pH7.4) 含 1% BSA, 0.03% Proclin300 和 50% 甘油。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!