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其他参数
Pre-Staining Fluorescent Sample Loading Buffer for SDS-PAGE
荧光蛋白上样缓冲液(SDS-PAGE)
产品规格: 100ul,1ml
每个规格包含 3 管:Instant-Bands, Resuspension Buffer 和 Enhancing buffer。只有使用 Bis-tris 胶 时才需要加 Enhancing Buffer.
保存条件:可于-20℃储存 12 个月,4℃储存 8 周,室温下储存 1 周。
简介:
荧光蛋白上样缓冲液在电泳前的样品处理阶段对 SDS-PAGE 的蛋白样品进行预染,标记上荧光。 实验完成以后,凝胶中或转膜后的蛋白条可直接通过紫外灯、LED 灯或其他数字成像系统进行观察和分 析,无需染色脱色。
荧光蛋白上样缓冲液灵敏度高比银染高。稳定性强,背景低。可对所有蛋白进行染色,不影响蛋白 的迁移率与电泳图谱。电泳过程中,游离的染料分子与溴酚蓝的迁移速率一致,跑胶结束时移至凝胶末 端,背景干净。荧光蛋白上样缓冲液非常适合用于追踪蛋白表达纯化以及 Western blot 的 SDS-PAGE。
使用步骤:
1. 请在使用前根据管壁标签上的体积加入 resuspension buffer 重悬。Resuspension buffer 在 4℃可能会有沉淀产生,室温下放置至沉淀消失。
2. 将用上样缓冲液处理的蛋白样品与待电泳蛋白样品 1:2 混合。比如,3ul 上样缓冲液+6ul 蛋白样品。
3. 90-100℃加热上述处理的样品混合液 5 分钟。细胞或组织样品,加热时间延长至 10 分钟。确保加热温度>90℃使样品充分受热。
大部分预制胶(Bis-Tris 体系除外)可以直接进行下一步。Bis-Tris 体系的预制胶(如 Life Technology),需加入 20%已处理样品体积的 Enhancing buffer。比如,10ul 已处理的样品需加入 2ul Enhancing buffer。
4. 样品可以上样进行电泳了(无需再加 Loading Buffer 处理)。
5. 电泳结束后,将凝胶放至透射仪上进行观察和拍照。透射仪可以是紫外灯,蓝光 LED 灯或其它凝胶成像系统。如果光源在可见光波长范畴的无需剥胶,因为可见波长范围内的光可以穿透玻璃或塑料材质的胶板。
6. (可选的)如果有需要,经荧光蛋白上样缓冲液处理的凝胶仍可进行考染。按标准的考染步骤进行即可。
注意事项:
1. 请勿使用该上样缓冲液处理预染的或预处理的蛋白分子量标准。这些产品与荧光蛋白上样缓冲液不兼容。
2. 灵敏度影响因素:高 pH(大于 7)不会影响染色,低 pH 则会降低染色的效率,如果样品的 pH 低于
5,建议将 pH 调整至 7 以上。
3. 荧光蛋白上样缓冲液不适合在如下 SDS-PAGE 实验中使用:切割蛋白条带用以测序、质谱分析或抗体制备。
4. 建议-20℃保存,如果室温放置 2-3 周,则可添加新的 DTT,蛋白条带会重新变得清晰和明亮。添加DTT 的终浓度不要超过 20 mM。也可以添加其他还原剂 TCEP(2 mM), 效果也很好。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!