找不到产品?留下需求帮您找
一键询价梅里埃 10400奈瑟氏球菌嗜血菌鉴定盒API NH
两周
面议
梅里埃 API氧化酶试剂
两周
面议
CCFSTTG1 人脑星形细胞瘤 QCH828
一周
3500¥
MM28 人眼葡萄膜黑色瘤細胞 QCH829
一周
5500¥
HCC202 人乳腺原发性导管癌 QCH830
一周
3000¥
HCC2157 人乳腺导管癌细胞(三阴性)QCH831
一周
5000¥
hCMEC/D3-RFP红色荧光蛋白标记的人脑微血管内皮细胞 QCH346R
一周
3500¥
KHYG-1 人NK细胞淋巴瘤细胞 QCH833
一周
3500¥
NCI-h1869 人非小细胞肺癌鳞癌细胞 QCH834
一周
3500¥
NCI-H1417 人小细胞肺癌细胞 QCH835
钦诚生物 | 一周
3500¥
其他参数
rProtein A/G 免疫沉淀磁珠 (IP Grade)
rProtein A/G MagPoly Beads (IP Grade)
产品规格: 1ml / 5ml
产品描述:
rProtein A/G 免疫沉淀磁珠 (rProtein A/G MagPoly Beads) 是由高质量的 Recombination Protein A/G 高密度定向包 被到超顺磁性聚合物微球表面,该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,一步纯化即可从血清样品中分 离出纯度大于 90%的抗体,操作简便高效。Protein A/G 免疫磁珠同时共价偶联了蛋白 A 和蛋白 G,比单独的蛋白 A 或者蛋 白 G 都有更广的结合范围,实用性更高。 rProtein A/G 免疫沉淀磁珠性能参数:
操作流程:
本操作流程主要为免疫沉淀反应,每次反应使用 50 μL rProtein A/G MagPoly Beads, 可根据需要适当的增加或减少磁珠使用量。
1. 缓冲液准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。
平衡/洗液:0.15M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0
洗脱液:0.1M 甘氨酸,pH 3.0
中和液:1M Tris-HCl,pH8.5
交联液:0.2 M 三乙醇胺, pH 8.2
交联剂:DMP (dimetylpimelimidate dihydrochloride) (20 mM DMP 需要现用现配)
终止液:50 mM Tris, pH 7.5
2. 磁珠准备
(1) 将 rProtein A/G MagPolyBeads 颠倒或漩涡混合均匀。
(2) 取 50μl rProtein A/G MagPoly Beads 加入新的 EP 管中。放置在磁分离器上,待溶液变澄清后,用移液器吸弃保护液。
(3) 将 EP 管从磁分离器上取下来,加入 200μl 平衡液,混匀,放置在磁分离器上,收集磁珠,用移液器吸弃保护液。重复洗 2 次。
3. 抗体吸附
(1) 加入 100μl 平衡液将磁珠悬浮,加入目标抗体溶液,充分混匀。
(2) 室温孵育 10min,可以振荡或漩涡混合均匀。
(3) 将 EP 管置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。如需要可留做进一步检测。
(4) 加入 500μl 洗杂液混合均匀,置于磁分离器上,待磁珠全部吸附后,吸弃上清液。重复洗杂至少 3 次。
4. 抗体交联 (备选)
(1) 如果需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱,请忽略本步骤,直接进行抗原结合反应操作。
(注:50ul-1ml 磁珠量均可以按照以下步骤操作,无需额外增加交联液体积。)
(2) 加入 1ml 交联液,振荡悬浮,置于磁分离器上,大约 1min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。
(3) 再加入 1ml 含有 20 mM DMP (dimetylpimelimidate dihydrochloride) 的交联液, 此试剂需要现用现配。振荡悬浮,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,促使溶液和磁珠充分接触,约 30min 后,置于磁分离器上,大约 1min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。
(4) 使用 1ml 终止液悬浮磁珠,终止交联反应,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,促使溶液和磁珠充分接触,约 15min 后,置于磁分离器上,大约 1min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。
(5) 加入 1ml 平衡液,颠倒混匀,置于磁分离器上,大约 1min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。再重复两次。
5. 抗原结合反应
(1) 加入含有抗原的样品 (通常 100-1000μL),用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。
(2) 在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管 10min,使抗原与抗体充分结合,如结合力较弱则可在室温下反应 1h 或者在 4℃下反应过夜。
(3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离,收集上清液,以备后续检测。
(4) 向离心管中加入 1ml 洗液,用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散,然后进行磁性分离,弃上清液;从磁分离器上取下离心管,再重复洗涤两次。
6. 抗原洗脱
A. 变性洗脱
此方法洗脱的样品适用于 SDS-PAGE 检测。
(1) 从磁分离器上取下离心管,向其中加入 25μl 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均匀,95℃加热 5min。
(2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集上清液进行 SDS-PAGE 检测。
B. 非变性洗脱
(1) 向磁珠-抗体-抗原复合物中加入 50 μl 洗脱液,混合均匀,室温孵育 5min。
(2) 置于磁性分离器上,进行磁性分离,收集洗脱液至新的 EP 管中。
(3) 重复步骤(1)和(2),收集洗脱液,与(2)中洗脱液混合,加入中和液中和至 pH7.0-8.0。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!