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其他参数
核糖核酸酶H
RNase H
产品规格:600 U
保存条件:
-20°C,有效期24个月
产品简介:
核糖核酸酶H (RNase H) 是一种核酸内切酶,可特异性地水解与DNA杂交的RNA的磷酸二酯键,产生具有游离5’-P和3’-OH末端的产物。该酶不能降解单链核酸、双链DNA或双链RNA。用于cDNA第二链合成前去除mRNA,DNA-RNA杂交体的鉴定,在Oligo(dT) 存在下去除mRNA 的poly(A)尾。
单位定义:
1单位指50μl反应体系中,37℃条件下,20min内从40pmol 长度为25bp的RNA-DNA杂交链中水解出1nmol核酸底物所需的酶量。
产品组份:
RNase H (60 U/μl): 10 μl
5x RNase H Buffer: 300 μl
(5 x RNase H Buffer 成分:500 mM TrisCl (pH 8.3 at 25°C),30 mM MgCl2,750 mM KCl,100 mM DTT)
操作步骤:
1. 在一无菌离心管中配制以下反应液:
DNA-RNA杂合体: 0.5~5 μg
5x RNase H Buffer: 10 μl
RNase H (60 U/μl): 1 μl
DEPC-ddH2O: 补足体积至50 μl
2. 30°C反应1小时。
3. 加入5 μl的3 M NaOAc (pH5.2)。
4. 加入125 μl的预冷无水乙醇,-20°C放置30~60分钟。
5. 离心回收沉淀,用预冷的70%乙醇清洗沉淀,真空干燥后备用。
注意事项:
该酶的最佳反应温度为37°C,65°C 20min使该酶失活。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!