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其他参数
绿色核酸凝胶染色液 (10,000 × in DMSO)
Green I nucleic acid gel stain (10,000 × in DMSO)
规格:50μl /100μl /500μl (10000X)
保存条件:
-20℃避光可保存 6 个月。(因为溶剂 DMSO 溶点是 18.3℃,使用前请放置到室 温充分溶解。)
Green I 核酸染料特点:
1. 无毒性:花菁染料,无致癌毒性。
2. 高灵敏:紫外凝胶透射仪观测灵敏度高于 EB 染色法 5-10 倍,用可见光透射仪比紫外光条件下的灵敏度比 EB 染色法高 20~30 倍。
3. 信噪比高:样品荧光信号强,无背景信号。
4. 操作简单:无须脱色或冲洗,即可用紫外凝胶透射仪观察或可见光透射仪观察。
5. 适用范围广:可适用于多种电泳分析,如琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。
6. 使用方便:不影响其它修饰酶作用(如:Taq 酶、内切酶、T4 连接酶、反转录酶等)。
7. 经济:价格比银染便宜。(例如:1ml 稀释 10 倍,即是 10000µl 可以使用 10000 次)。
Green I 核酸染料使用方法:
一. 胶染法(用法同 EB)
1. 制胶时加入Green I 核酸染料。冷却胶到 50℃左右,每 100ml 胶中加入 10-50µl Green I 核酸染料。
2. 按照常规方法进行电泳即可。
3. 用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:此方法染色可以准确确定片段分子量,用量相对较少。1ml 染料可以做 100 块 10 ml胶,每块胶点 50 个样,可以做 5000 次。
二. 点染法
1. 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和 PAGE 凝胶电泳。
2. 工作液的配制:用电泳缓冲液将 10000×的 Green I 稀释 100 倍,即为 Green I 工
作液。Green I 工作液可以置 2~8℃保存一个月以上, 浓缩液在-20℃保存半年。
3. 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
4. 样品染色:向分析样品中加入 Green I 工作液和载样缓冲液,室温放置 10 分钟,使
Green I 与样品中 DNA 充分结合。Green I 工作液加入量为总上样量的 1/5~1/10。
5) DNA Marker 染色:将 5μL DNA Marker、5μL DNA Marker 稀释液和 1μL Green I 工作液混匀,室温放置 5 分钟,使 Green I 与 DNA 充分结合。
6) 上样、电泳:按常规操作。用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃, 观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。通常点一个样加入 1µL 即可,可以使用 10000 次, 但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与 Marker 对比),建议使用胶染法。
三. 泡染法
1. 按照常规方法进行制胶,其中不含任何染料。
2. 用 pH 7.0 - 8.5 的缓冲液(如:TAE, TBE),按照 1:1000 的比例稀释Green I
3. 核酸染料,混匀,制成染色溶液。
4. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色 10-30 分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直 接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆 盖整个胶板,并染色 30 分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
5. 用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观测。蓝光可透过玻璃,观测聚丙烯酰胺凝胶时,可直接将托有凝胶的玻璃平皿放入可见光透射仪内观测。
*注:用泡染方法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中用量最大的。
几种染色方法特点比较:
Green I 核酸染料使用注意事项:
1. 在Green I 核酸染料样品点染方法,电泳时间不要超过 2 小时,否则Green I 核酸染料会从 DNA/RNA 上分离出来,会产生弥散状条带。
2. 用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(和 Marker 对比),建议用胶染法和泡染法。
3. 常规用酒精沉淀核酸过程中,Green I 核酸染料可以全部从核酸上去掉。
4. DNA 电泳请选择Green I 染料,RNA 电泳请选择Green II 染料,两种染料不通用。
5. Green I 核酸染料对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
6) 可以加 Orange Red 作为标记,pH 值在 7.5-8.3 之间,不要微波加热,加入热胶的温度低于50 度。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!