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其他参数
线粒体提取试剂盒
Mitochondria Isolation Kit
产品规格:50T
产品组成及保存条件:
保质期:有效期 1 年。
产品介绍:
线粒体是半自主性细胞器,不仅是细胞内氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷(ATP)的主要场所,为细胞的活动提供能量,而且在许多生命活动中具有重要调控作用。因此,准确和全面分离保持正常活性的线粒体已经成为许多研究的前提。
利用专门试剂温和匀浆组织和细胞,再采用差速离心法从匀浆中分离完整线粒体;利用专门试剂,配合超声波破碎线粒体,可以得到保持活性的线粒体酶。
线粒体提取试剂盒 (Mitochondria Isolation Kit) 用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的分离提取。其制备物产量高,可用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。本产品仅用于科研领域,不用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
1. 低温离心机、匀浆器
2. PBS
提取步骤
1. 清洗:取新鲜组织(不宜采用冻存的组织),准确称取约 0.1g 组织或收集约 500 万细胞,用预冷的 PBS 清洗一次,冰上剪成 3mm2 大小的组织碎片。
2. 匀浆裂解:加入 10 倍体积的预冷 Mitochondria Lysis buffer(如需获得细胞浆蛋白,应提前加入PMSF,至 PMSF 浓度为 1×),置于冰浴上,用匀浆器或研钵研磨。
3. 离心:4℃,600g 离心 5min 以去除细胞核、未破碎的细胞核大的膜碎片。注:如需获得纯度更高的线粒体,可以将此步骤的离心速度改为 2000g 离心 3min,相应的相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
4. 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,4℃,12000g 离心 10min。注:如需获得纯度更高的线粒体,可以将此步骤的离心速度改为 6000g 离心 10min,相应的相同数量细胞的线粒体抽提得率会下降。
5. 上清液即胞浆提取物,可用于研究细胞浆蛋白或线粒体蛋白向胞浆的释放。沉淀为完整线粒体。含有完整的内膜和外膜,并具有线粒体的生理功能。可用于线粒体的生理功能等方面的研究。
6. 在沉淀中加入 200uL 和 2uL 100mM PMSF,超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),可用于线粒体酶活性测定。
7. 在沉淀中加入 200uL 和 2uL 100mM PMSF,超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),可用于线粒体蛋白浓度测定。
注意事项
1. 分离线粒体和提取线粒体蛋白质的所有步骤均需在冰上或 4℃进行,所用溶液需冰浴或 4℃预冷。
2. 通常在分离线粒体时前后两次离心速度选取 600g 和 12000g,如果希望纯度更高,但对线粒体的得率要求不高,前后两次离心速度可以采用 2000g 和 6000g。
3. 试剂(如 PMSF)对于不同实验不必全部使用,在实验条件成熟后也可以不必使用。
4. 如果不是用于制备线粒体蛋白,PMSF 不必使用;如果用于制备线粒体蛋白样品,需要添加 PMSF。PMSF 一定要在试剂计入到样品中前 1~2min 内加入,以免 PMSF 在水溶液中很快失效。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!