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仪器信息网试剂标物生化试剂生物分子磷酸钙法细胞转染试剂盒

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上海博尔森生物科技有限公司

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磷酸钙法细胞转染试剂盒

价格：￥ 380

品牌：博尔森

供货周期：现货

货号：BES27071C

规格：200T

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磷酸钙法细胞转染试剂盒

产品规格：200T‍

保存条件: -20℃保存，有效期12个月。

产品简介：

外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。磷酸钙法细胞转染试剂盒(Calcium Phosphate Cell Transfection Kit)是在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性，可用于磷酸钙法转染细胞，不仅可以瞬时表达，也可以筛选稳定株。HEK293 是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达 85%以上，一般的转染效率可达 40～50%左右。其他常见细胞(例如 Hela、CHO 细胞等)也适合磷酸钙法转染，但效率比 293 细胞要略低一些。本转染试剂盒主要适合于大多数贴壁细胞的转染，也可于一些悬浮细胞的转染，一般要求 DNA 浓度在 10～50μg 为宜，Hela、BALB 等细胞沉淀放置 16h， CHO、DUKX、BⅡ等细胞可以通过甘油、DMSO 进行热休克处理以提高转染效率。

本产品仅用于科研，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：

自备材料：

1. 胰蛋白酶消化液

2. 完全培养基

3. PBS

4. 无菌水

操作步骤(仅供参考)：

(一)贴壁细胞转染：

1. 在转染前 24h 用胰蛋白酶消化培养细胞，取适量对数期细胞转移至新的培养器皿中，待细胞密度达 70~80% 即可进行转染。后续操作步骤均按 6 孔板计算，如果转染器皿不同，请按比例自行调节用量。

2. 在加入 DNA 之前 2~4h，加入不含抗生素的完全培养液，置于 CO₂ 培养箱培养，37℃，5% CO₂。

3. 取 2~6ug DNA(体积不宜超过 20μl)加入 100ul Calcium chloride solution 混匀即为DNA-CaCl₂ 溶液。

4. 取 BBS solution 100μl，用移液器一边吹打 BBS solution，一边逐滴加入 DNA-CaCl₂溶液(操作缓慢，一般在 1～2min)。

5. 室温静置 20~30min，即为 DNA-CaCl₂-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。

6. 取 DNA-CaCl2-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板细胞中，轻轻晃动混匀。

7. 置于 37℃ 5% CO2 培养箱培养 4~16h。如果培养细胞为 CHO、DUKX 等，可以 DMSO或甘油进行休克处理，转染效率会大大增加，即培养后，用 2ml 含 10%甘油或 20%DMSO的完全培养液替换当前培养液，室温下静置，加 PBS 摇动混匀。

8. 去除培养液，用 PBS 清洗细胞 2 次，加入完全培养液继续培养，一般 24h 后可见转染细胞的表达。

(二)悬浮细胞转染：

1. 低速离心收集悬浮细胞，用 PBS 洗涤 1 次。

2. 取 2~6ug DNA(体积不宜超过 20μl)加入 Calcium chloride solution，混匀，即为 DNACaCl₂溶液。

3. 取 BBS solution 100μl，用移液器一边吹打 BBS solution，一边逐滴加入 DNA-CaCl₂溶液(操作缓慢，一般在 1～2min)。

4. 室温静置 20~30min，即为 DNA-CaCl₂-BBS 溶液，此时可能出现极其微小颗粒沉淀。

5. 每 10⁶ 个细胞沉淀用 100ul DNA-CaCl₂-BBS 溶液重新悬浮，室温放置 20~30min。

6. 6 孔板每孔加入 2ml 不含抗生素的完全培养基，取 DNA-CaCl₂-BBS 溶液底部物质均匀加入到 6 孔板中，轻轻晃动混匀。

7. 置于 37℃ 5% CO2 培养箱培养 4~16h，去除培养液，用 PBS 清洗细胞 2 次，加入 2ml完全培养液继续培养，一般 24h 后可见转染细胞的表达。

注意事项：

1. 注意无菌操作，尽量避免污染，同时 DNA 不应含有蛋白和酚。

2. 休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高，但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。

3. 转染 12～24h 后，可以加入终浓度为 10mmol/L 的丁酸钠溶液，可以提高病毒滴度。

4. BBS solution 的 pH 值直接关系到转染效率，尽量避免长时间暴露在空气中，以免被空气中的二氧化碳酸化。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

生化试剂磷酸钙法细胞转染试剂盒由上海博尔森生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子磷酸钙法细胞转染试剂盒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应磷酸钙法细胞转染试剂盒外，上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供：二安替比林甲烷、焦硫酸钾、偶氮甲碱H

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