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上海博尔森生物科技有限公司

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细胞增殖及毒性检测试剂盒

价格：￥ 232

品牌：博尔森

供货周期：现货

货号：BES200208BA

规格：100T

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细胞增殖及毒性检测试剂盒

产品规格:100T 500T 10×500T

保存条件:-20℃可保存至少一年。避免反复冻融，建议分装保存。

产品简介：

Enhanced cell Counting Kit-8，即增强型 CCK-8 试剂盒，是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan (见下图) ，且细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系。

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WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品，和 MTT 或其它 MTT 类似产品，如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶剂来溶解；而 WST-8 和 XTT、MTS 产生的formazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。，WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定，使实验结果更可靠。第四，WST-8 和 MTT、XTT 等相比线性范围更宽，灵敏度更高，并且更加稳定。

WST-8 对细胞无明显毒性，可以直接加入到细胞样品中，无需预配各种成分；显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，检测时间更加灵活，便于确定测定时间；酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

使用说明：

本试剂盒可用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可用于药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。

细胞数目检测

1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，设置 5-7 个细胞浓度梯度，每组 3-5 个复孔。

3. 接种后培养 2-4h 使细胞贴壁，然后每 100μL 培养基加 10μL CCK-8 试剂培养 1-4h 后测定 OD 值。

4. 以细胞数量为横坐标，OD 值为纵坐标绘制标准曲线。

5. 在实验条件完全一致的条件下可以根据标准曲线，推算出未知样品的细胞数量。

细胞活性检测

1. 在 96 孔板中接种细胞悬液（以每孔不低于 5000 个/100μL 为宜），根据具体实验情况培养过夜或一定时间。

2. 每孔加入 10μL CCK-8 溶液，避免气泡生成。

3. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4h，孵育时间需根据细胞的类型和细胞密度等具体情况而定；2h 显色效果。

4. 用酶标仪测定 450 nm 处的吸光度；若暂时不测定 OD 值，每孔加入 10μL 1%SDS 或 0.1M HCl，避光室温保存，24 小时内进行测定。

细胞增殖-毒性检测

1. 在 96 孔板中接种细胞悬液（以每孔不低于 5000 个/100μL 为宜），根据具体实验情况培养细胞过夜或一定时间。

2. 每孔加入不同浓度的待测药物。

3. 将培养板在培养箱孵育一定时间。

4. 每孔加入 10μL CCK-8 溶液，避免气泡生成。

5. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4h，孵育时间需根据细胞的类型和细胞密度等具体情况而定；2h 显色效果。

6. 用酶标仪测定 450nm 处的吸光度；若暂时不测定 OD 值，每孔加入 10μL 1%SDS 或 0.1M HCl，避光室温保存，24 小时内进行测定。

计算公式：

细胞存活率 =[(ODs-ODb) / (ODc-ODb)] ×

抑制率 =[(ODc-ODs) / (ODc-ODb)] ×

ODs: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液)

ODc: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物)

ODb: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物)

质量验证数据展示：

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细胞系及细胞总量：SP2/0、105个/100ul

培养条件：DMEM，10%FBS；37℃，5% CO2；

孵育时间：1h\2h\3h

注意事项：

1 每孔所用细胞数目需根据细胞的大小、增殖速度及实验具体要求而定，建议细胞总量范围为 0-10⁵个/孔。

2 实验中可以用加了等量细胞培养液和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照；若担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了等量细胞培养液、药物和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

3 CCK-8 加入量根据培养体积确定，添加量为 10ul/100ul 培养体积。

4 若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化，建议更换培养基后再加 CCK-8 检测。

5 为了使 CCK-8 试剂盒培养基充分混匀，减少 CCK-8 在移液器上的残留，建议加样前用培养基稀释CCK-8 试剂，混匀后加样。

6 若待测体系中含有还原剂（或抗氧化剂）会造成背景值升高，干扰检测结果，应在加 CCK-8 试剂前将其去除或折算干扰因素。

7 本产品保存时建议避光保存，使用时也请尽量避免强光直射。

8 本产品于专业人员的科学研究，不得用于临床诊断或，不得用于食品或药品。

9 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

生化试剂细胞增殖及毒性检测试剂盒由上海博尔森生物科技有限公司为您提供，如想了解更多关于生物分子细胞增殖及毒性检测试剂盒的报价、规格、厂家等信息，欢迎来电或留言咨询。除供应细胞增殖及毒性检测试剂盒外，上海博尔森生物科技有限公司还可为您提供：二安替比林甲烷、焦硫酸钾、偶氮甲碱H

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