找不到产品?留下需求帮您找
一键询价赛多利斯 Microsart ATMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart AMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart ATMP 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart® ATMP 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体校准试剂(DNA标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart® 细菌验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 细菌校准试剂(DNA标准品)
赛多利斯 | 一周
面议
犬瘟热病毒RT-PCR试剂盒
【产品名称】
英文名称:Canine Distemper Virus(CDV) RT-PCR Kit
中文名称:犬瘟热病毒RT-PCR试剂盒
【包装规格】
50T/盒
【预期用途】
犬瘟--亦称犬瘟热,属于病原性病毒。主要侵犯狗科、鼬科动物。属于副粘液病毒。感染后潜伏期短,死亡率约 50%。在鸡胚成纤维细胞、狗肾细胞的培养细胞中生殖其减毒的病毒可用为活疫苗。为此本公司开发了本产品,采用 RT-PCR 技术检测犬瘟热病毒。它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
3. 产品精心优化且特异性高,引物是根据犬瘟热病毒 RNA 高度保守区设计,不会跟除此之外的其它病毒 RNA 发生交叉反应。
4. RT-PCR mix 中含上样染料,扩增反应后可以直接上样电泳。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 PCR 反应。
6. 本产品只能用于定性实验,不能用于定量。
7. 本产品只能用于科研。
【检验原理】
本试剂盒采用RT-PCR技术,针对犬瘟热病毒的基因高度保守区域设计特异性引物,用RT-PCR 技术对犬瘟热病毒的核酸进行体外扩增检测,在反应体系中含犬瘟热病毒核酸模板的情况下,RT-PCR反应进行特异性扩增,利用琼脂糖凝胶电泳技术对RT-PCR扩增产物进行检测,依据特异性扩增片段的结果,判断待检样品中是否含有犬瘟热病毒成分,实现检测结果的定性分析。
【试剂组成】
名称 | 规格 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200μL×1管 |
MMLV-Taq Mix | 75μL×1管 |
超纯水 | 1mL×1管 |
犬瘟热病毒RT-PCR引物混合液 | 100μL×1管 |
犬瘟热病毒RT-PCR阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) | 50μL×1管 |
核酸释放剂 | 20 次1mL×1管 |
使用手册 | 一份 |
注:为避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。
【储存条件及有效期】
低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
【自备试剂】
样品 RNA。
【样品RNA的制备】
1. 如果有 N 个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL犬瘟热病毒PCR阳性对照的10000倍稀释的(稀释后浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL 相当于1万拷贝,可以将10μL原液加入到990μL自备TE溶液中,充分混匀,此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL自备TE溶液中,充分混匀,此为10000倍稀释液)再加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟样品一样,样品体积多少取决于所用试剂盒的要求)。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。
【设置 RT-PCR 反应(20μL 体系】
3. 如果有N+2个样品,则标记N+4个PCR管(额外增加的两个管一个是RT-PCR阳性对照,另一个是RT-PCR阴性对照)并按照下表在PCR管中加入下列成分:
成份 | N+2 个样品管 | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性对照 |
5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 各4μL | 4μL | 4μL |
犬瘟热病毒RT-PCR引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
N+2个制备的RNA样品 | 各12.5μL | 不加 | 不加 |
超纯水 | 不加 | 12.5μL | 不加 |
犬瘟热病毒RT-PCR阳性对照的10000倍稀释液 | 不加 | 不加 | 12.5μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5μL | 1.5μL | 1.5μL |
4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果,阳性样品预期得到的扩增产物长度为 720bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物,则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果,如果有此扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。
6. 检测方法的局限性
Ø 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
Ø 阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
Ø 不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
Ø 试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果。
7. 注意事项
Ø 所有操作严格按照说明书进行;
Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化,混匀并短暂离心;
Ø 反应液应避光保存;
Ø 反应中尽量避免气泡存在,管盖需盖紧;
Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!