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获取电话大麦条纹花叶病毒RT-PCR试剂盒
【产品名称】
英文名称：Barley Stripe Mosaic Virus(BSMV) RT-PCR Kit
中文名称：大麦条纹花叶病毒RT-PCR试剂盒
【包装规格】
50T/盒
【预期用途】
大麦条纹花叶病毒(Barley Stripe Mosaic Virus，BSMV)病毒粒体棒状，含三种基因组RNA，有几种株系还含有分子量280000的亚基因组RNA。它可以在所有植物组织中繁殖。在叶肉细胞和表皮细胞的细胞质中，叶绿体表面和细胞核中均有发现。BSMV能进入种子和花粉中，还会侵染到胚珠中，随着世界性种质资源的流通传遍各大洲，一度严重影响世界大麦的产量。BSMV病毒危害大麦、小麦、玉米、植物症状表现因毒株、寄主品种和环境因素而不同。不同株系在叶面产生细线条至纵向条纹症状，不同寄主植物上分别产生淡绿色条纹、褪绿、坏死等。被害种子小而皱缩，长出植株严重矮化。因此灵敏快捷地检测大麦条纹花叶病毒具有重要的意义。本产品就是为满足此需求而开发的、专门检测大麦条纹花叶病毒的RT-PCR试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品RNA模板。
2.产品经过精心优化，分析灵敏性能到达 100拷贝/反应。
3.提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
4.特异性高，引物是根据大麦条纹花叶病毒RNA高度保守区设计，只能检测大麦条纹花叶病毒，不会跟除此之外的其他病毒的RNA发生交叉反应。
5.本产品足够50次20μL体系的RT-PCR反应。
6.本产品只能用于定性实验，不能用于定量。
7.本产品只能用于科研。
【检验原理】
本试剂盒采用RT-PCR技术，针对大麦条纹花叶病毒的基因高度保守区域设计特异性引物，用RT-PCR 技术对大麦条纹花叶病毒的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含大麦条纹花叶病毒核酸模板的情况下，RT-PCR反应进行特异性扩增，利用琼脂糖凝胶电泳技术对RT-PCR扩增产物进行检测，依据特异性扩增片段的结果，判断待检样品中是否含有大麦条纹花叶病毒成分，实现检测结果的定性分析。
【试剂组成】
名称 | 规格 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer | 200μL×1管 |
MMLV-Taq Mix | 75μL×1管 |
超纯水 | 1mL×1管 |
大麦条纹花叶病毒RT-PCR引物混合液 | 100μL×1管 |
大麦条纹花叶病毒RT-PCR阳性对照 （1×10E8 拷贝/μL） | 50μL×1管 |
核酸释放剂 | 20 次1mL×1管 |
使用手册 | 一份 |
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。
【储存条件及有效期】
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
【自备试剂】
样品 RNA。
【样品RNA的制备】
1. 如果有 N 个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL大麦条纹花叶病毒PCR阳性对照的10000倍稀释的（稀释后浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于1万拷贝，可以将10μL原液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为10000倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。
【设置 RT-PCR 反应（20μL 体系】
3. 如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳性对照，另一个是RT-PCR阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：
成份 | N+2 个样品管 | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性对照 |
5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 各4μL | 4μL | 4μL |
大麦条纹花叶病毒RT-PCR引物混合液 | 各2μL | 2μL | 2μL |
N+2个制备的RNA样品 | 各12.5μL | 不加 | 不加 |
超纯水 | 不加 | 12.5μL | 不加 |
大麦条纹花叶病毒RT-PCR阳性对照的10000倍稀释液 | 不加 | 不加 | 12.5μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5μL | 1.5μL | 1.5μL |
4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 720bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
6. 检测方法的局限性
Ø 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
Ø 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
Ø 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
Ø 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。
7. 注意事项
Ø 所有操作严格按照说明书进行；
Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；
Ø 反应液应避光保存；
Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
