找不到产品?留下需求帮您找
一键询价赛多利斯 Microsart ATMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart AMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart ATMP 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart® ATMP 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体校准试剂(DNA标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart® 细菌验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 细菌校准试剂(DNA标准品)
赛多利斯 | 一周
面议
牛呼吸道合胞体病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
【产品名称】
中文名称:牛呼吸道合胞体病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
英文名称:Bovine Respiartory Syncytial Virus(BRSV) RT-PCR Kit
【包装规格】
50T/盒
【产品简介】:
牛呼吸道合胞体病毒(Bovine Respiartory Syncytial Virus,BRSV)是一种DNA 病毒,在动物中主要感染牛,恶劣养殖环境、长途运输和过早断奶等应激会促进本病的发生,若继发细菌感染则死亡率会大幅提高。本病感染后常无明显临床症状,感染上呼吸道时表现为咳嗽,鼻及眼有分泌物。当严重感染时,病畜表现为厌食、精神不振、体温升高、呼吸急迫、泌乳奶牛产奶量下降、咳嗽、流鼻液、流泪以及流涎等,因此灵敏快捷的诊断产品具有重要的意义。本产品就是以探针法荧光定量 RT-PCR 技术为基础开发的专门检测牛呼吸道合胞体病毒型的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 RNA 模板。
2. 引物和探针经过优化,分析灵敏性高。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据牛呼吸道合胞体病毒高度保守区设计,不会跟其他病毒的 RNA 发生交叉反应。
5. 既可用于定性检测,又可用于定量检测。用于定量检测时线性范围至少为 5个数量级。
6. 本产品足够 50 次 20μL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR 反应。
7. 本产品只能用于科研。
【检验原理】:
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,设计一对牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)特异性引物,结合一条特异性探针,用一步法荧光RT-PCR技术对牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)的核酸进行体外扩增检测。
【包装规格及成分】
编号 | 成分 | 规格 |
试剂一 | BRSV扩增液 | 50μL×1管 |
试剂二 | BRSV反应液 | 950uL×1管 |
试剂三 | BRSV阳性质控品(5.59E+04) | 50μL×1管 |
试剂四 | BRSV阴性质控品 | 50μL×1管 |
产品说明书 | 1份 | |
注: 1) 不同批号的试剂盒组分不可交互使用。 2) 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。 3) 自备:无DNA/RNA酶的1.5mL离心管,0.2mL PCR反应管,滤芯吸头(规格:10μL,200μL,1000μL),离心机,振荡混合器,各种规格的移液器。 4) 禁止与其他品牌/自配的试剂混用,否则会影响使用效果。 |
【储存条件及有效期】:
1.试剂盒应置于-15℃以下冷冻避光储存;有效期12个月,采用泡沫盒加生物冰袋密封运输,温度不超过8℃,生产日期及有效期详见外包装盒。
2.试剂盒避免反复冻融,冻融次数不超过5次,开封后-15℃以下冷冻避光储存,不影响有效期内使用。
【适用仪器】:
ABI、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】:
1.根据实际情况可采取病毒/组织/血液等样品1g作为检测样本
2.应避免样本间交叉污染,样本采集后应及时检测,也可保存于-20±5℃待检,长期保存应置于-70℃以下。
【样本保存及运输】:
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【使用方法】:
1.样品处理(样本处理区)
1.1样本前处理
1)组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;
2)全血样本:待血凝固后,取血清100μL于1.5mL灭菌离心管中。
1.2核酸(RNA)提取
根据您实验室的具体情况和样品类型,选择适当的提取策略方法。为了使实验结果稳定、有效、可靠,我们建议使用商品化病毒DNA/RNA提取试剂盒进行提取,严格按照对应试剂盒说明书进行操作,样本核酸提取过程中应避免污染,提取好的模板样品如不能立即检测,建议-15℃以下保存。
推荐采用我们公司研发生产的病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒
2.试剂配制(试剂准备区)
2.1从-15℃以下冰箱中取出试剂盒平衡到室温(20~25℃),注意避免强光照射,待完全溶解后振荡混匀并低速离心10 s,使用低吸附吸头分液取样,避免试剂损失和浪费。
2.2根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照;样品每满7份,多配制1份),每测试反应体系配制如下表:
试剂 | BRSV反应液 | BRSV扩增液 |
用量(样本数为N) | 19μL | 1μL |
2.3在适当容积的无菌离心管中加入上述试剂,充分振荡混匀后2000 rpm离心10 s,按照20μL/管分装量将试剂分装至八联PCR反应管中。
2.4盖紧八联PCR反应管盖,并注意做好相应标识(请标记在八联PCR反应管盖两端突出部位,切勿标记在八联PCR反应管盖中间,以免影响信号采集)。将PCR反应管转移至样本准备区,剩余试剂放回-15℃以下冰箱冷冻保存。
3.加样(样本处理区)
将步骤1.2提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心,核酸加样过程中应避免污染。
4.PCR扩增(核酸扩增区)
4.1将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内,并记录放置顺序;
4.2设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;
4.3荧光通道选择:检测通道选择FAM,淬灭通道选择NONE,参比荧光选NONE。
【推荐循环参数设置】:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 50℃ | 15min | 否 |
2 | 1 cycle | 95℃ | 3min | 否 |
40 cycles | 95℃ | 15sec | 否 | |
55℃ | 30sec | 是 |
5.【结果分析判断】
5.1结果分析条件设定
设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
5.2结果判断
1)阳性:检测通道Ct值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
2)可疑:检测通道Ct值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现Ct值≤38.0和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
3)阴性:检测结果Ct值无Ct值,无明显的扩增曲线。
6.【质控标准】
1)阴性质控品:无明显扩增曲线或无Ct值显示;
2)阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤30;
3)以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
7.【产品性能指标】
1)阴阳性参考品符合率:5份阳性参考品符合率为100%;10份阴性参考品符合率为100%。
2)最低检测限:1.0×103copies/mL。
3)精密度:批内、批间精密度检测Ct值的变异系数(CV)均小于等于3%。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!