找不到产品?留下需求帮您找
一键询价赛多利斯 Microsart ATMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart AMP DNA提取试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart ATMP 细菌检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart Research 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart® ATMP 支原体检测试剂盒
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 支原体校准试剂(DNA标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart® 细菌验证标准品(菌株标准品)
一周
面议
赛多利斯 Microsart 细菌校准试剂(DNA标准品)
赛多利斯 | 一周
面议
犬冠状病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒
产品介绍
【产品名称】犬冠状病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒(荧光RT-PCR法)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】
本试剂盒适用于检测的扁桃体、淋巴结等组织病变部与健康部交界处组织、全血等标本中犬冠状病毒RNA,适用于犬冠状病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术,通过设计一对禽犬冠状病毒特异性引物,结合一条特异性探针,用荧光PCR技术对犬冠状病毒的核酸进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名 称 | 规 格 |
酶液 | 50μL×1管 |
CDV反应液 | 1100μL×1管 |
CDV阳性质控品 | 200μL×1管 |
阴性质控品 | 200μL×1管 |
备注:不同批号的试剂盒组分不宜交叉使用。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、运输、反复冻融≤5次,有效期12个月。
【适用仪器】
ABI系列 、安捷伦MX3000P/3005P、Bio-Rad等系列荧光定量PCR检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀动物,取分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃,长期保存可置-70℃,但不能超过6个月,标本运送应采用2~8℃冰袋运输,严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1样本前处理
组织样品:每份组织分别从3个不同的位置称取样品约1g,手术剪剪碎混匀后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理盐水后继续研磨,待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中,8000rpm离心2min,取上清液100μL于1.5mL灭菌离心管中;
全血及血清样本:待血凝固后,取血清100μL于1.5mL灭菌离心管中,进行核酸提取。
棉签采集样本:用超纯水或生理盐水浸泡后,离心后取澄清部分,直接检测无需提取核酸。
其他液体类样本:离心后取澄清部分,直接检测无需提取核酸。
1.2核酸提取
按照相应RNA核酸提取试剂盒进行核酸提取,核酸提取产物-20℃保存。
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数,设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照,每个测试反应体系配制如下表:
试剂 | CPIV反应液 | 酶液 |
用量(样本数为N) | 19μL | 1μL |
3. 加样(样本处理区)
将步骤1提取的RNA、阳性质控品、阴性质控品各取5μL,分别加入相应的反应管中,盖好管盖,混匀,短暂离心。
4. PCR扩增(核酸扩增区)
4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内;
4.2 设置好通道、样品信息,反应体系设置为25μL;
荧光通道选择: AIV检测通道选择FAM,NDV检测通道选择VIC, 淬灭通道选择NONE,参比荧光选NONE。
4.3 推荐循环参数设置:
步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
1 | 1 cycle | 50℃ | 15min | 否 |
2 | 1 cycle | 95℃ | 3min | 否 |
3 | 40 cycles | 15sec | 否 | |
55℃ | 30sec | 是 |
5. 结果分析判定
5.1结果分析条件设定
5.2设置Baseline和Threshold:一般直接按机器自动分析的结果分析,当曲线出现整体倾斜时,根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节),以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照),重新分析结果。
5.3结果判断
阳性:检测通道Ct值≤35.0,且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑:检测通道Ct值>35.0,且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验,重复试验结果出现Ct值≤35.0和典型扩增曲线者为阳性,否则为阴性。
阴性:样本检测结果无Ct值且无明显的扩增曲线。
6. 质控标准
阴性质控品:无明显扩增曲线或无Ct值显示;
阳性质控品:扩增曲线有明显指数生长期,且Ct值≤30;
以上条件应同时满足,否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关;
样本提取过程中没有控制好交叉污染,会出现假阳性结果;
阳性对照、扩增产物泄漏,会导致假阳性结果;
病原体在流行过程中基因突变、重组,会导致假阴性结果;
不同的提取方法存在提取效率差异,会导致假阴性结果;
试剂运输,保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,出现假阴性或定量检测不准确的结果;
本检测结果仅供参考,如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
所有操作严格按照说明书进行;
试剂盒内各种组分使用前应自然融化,完全混匀并短暂离心;
反应液应避光保存;
反应中管盖需盖紧;
使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服;
样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行,以免交叉污染;
实验完毕后用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器;
试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!