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柱式血清/血浆游离DNA提取试剂盒(柱式血清/血浆游离DNAout)(cfDNA)
产品及特点 本产品是基于离心柱层析法,用于从血浆/血清中方便、快速、可靠地提取游离循环 DNA(circulating DNA、cell-free DNA,cfDNA)。本产品可用于从新鲜或冷冻血浆/血清样品中分离各种大小的 cfDNA,它具有下列特点:
1. 操作简单,整个过程只需要 20 分钟左右。
2. 不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
3. 安全无毒,不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
4. 与 PCR 和荧光 PCR 兼容。
5. 可在 30 μL~100 μL 范围内灵活调节洗脱体积浓缩循环 DNA。
6. 适用于各种血清和血浆。
规格及成分
运输及保存 常温运输及保存,柱式血清/血浆游离 DNA 溶液 A 长期(1 月以上)放置时需要放 4℃。 有效期一年。
自备试剂 无,但需要自备 RNase-free 的 1.5 mL 离心管(耗材)。
使用方法
1. 如果有 N 个样品,标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管,多出的一个为阳性对照(PC),一个为阴性对照(NC)。为避免污染,建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记,以在后续操作时区别向心面和离心面。然后在离心管中分别加入 0.2 mL 血清或血浆,在PC 管中加入已经确认有阳性 DNA 的血清或血浆,在 NC 管中加入已经确认没有阳性 DNA 的血清或血浆。
2. 加入 0.6 mL 柱式血清/血浆游离 DNA 到各离心管中,振荡 30 秒混匀后室温放置 10 分钟。注意:柱式血清/血浆游离 DNA 溶液 A 在 4℃放置后可能会产生结晶,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中,颠倒混匀后转移一半的混合液(0.8mL)到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。
4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
5. 将剩余的另外一半裂解液(0.8mL)转移到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。
6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤,可以跳过。
9. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟(干甩),弃含穿透液的离心管。
10. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的 1.5 mL 离心管中,在离心吸附柱的滤膜的中部加入 30uL DNA 洗脱液 3.0,然后室温放置 2 分钟。
11. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,离心管中的溶液即为游离 DNA 溶液。
12. DNA 样品可以直接用于 PCR,也可放-20℃长期保存。
使用方法
1. 如果有 N 个样品,标记 N+2 个 1.5-2 mL 螺旋盖塑料离心管,多出的一个为阳性对照(PC),一个为阴性对照(NC)。 为避免污染,建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记,以在后续 操作时区别向心面和离心面。然后在离心管中分别加入 0.2 mL 血清或血浆,在 PC 管中加入已经确认有阳性 DNA 的血清或血浆,在 NC 管中加入已经确认没有 阳性 DNA 的血清或血浆。
2. 加入 0.6 mL 柱式血清/血浆游离 DNA 到各离心管中,振荡 30 秒混匀后室温放 置 10 分钟。注意:柱式血清/血浆游离 DNA 溶液 A 在 4℃放置后可能会产生结 晶,使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3. 加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中,颠倒混匀后转移一半的混合液(0.8mL) 到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。
4. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集 管中。
5. 将剩余的另外一半裂解液(0.8mL)转移到离心吸附柱中,室温放置 2 分钟。
6. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,弃收集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集 管中。
7. 加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心 1 分钟,弃收 集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。
8. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12,000 rmp 室温离心 1 分钟,弃收 集管中的穿透液,把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤,可以跳过。
9. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟(干甩),弃含穿透液的离心管。
10. 将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的 1.5 mL 离心管中,在离心吸附柱的滤 膜的中部加入 30uL DNA 洗脱液 3.0,然后室温放置 2 分钟。
11. 12,000 rpm 室温离心 1 分钟,离心管中的溶液即为游离 DNA 溶液。
12. DNA 样品可以直接用于 PCR,也可放-20℃长期保存。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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