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一站式RNA电泳套装
产品及特点 本产品是包括琼脂糖、去离子甲醛、RNA 上样液、电泳液等在内的 RNA 电泳套装,专门用于 RNA 电泳分析。可以进行至少 10 次 mini 变性胶电泳。
1. 即开即用,用户不需要自己进行 RNase 灭活、高压灭菌、pH 调节等操作。
2. 与 Northern 杂交等后续反应兼容。
规格及成分
运输及保存 常温运输和保存,但 RNAon 长期需要-20℃保存,有效期一年。
自备试剂 EB (10 mg/mL)、DEPC 水。
使用方法 注意:所有器皿(三角瓶,电泳槽,枪头等)均需去除 RNase。强烈推荐使用本公司的超强无毒的固相 RNase 清除剂。
一、配制琼脂糖甲醛变性胶(1.2%, 100 mL)
1. 在三角瓶中加入下列成份:
琼脂糖 1.2 -1.5 g
无菌水 87 mL
2. 将琼脂糖加热融化后,加入 10 mL 10×RNArun(注意:10×RNArun即 10×MOPS 电泳缓冲液,瓶子一旦打开,就很容易产生污染细菌,细菌大量繁殖后会释放大量 RNase,所以剩下的 10×RNArun 最好-20℃放置)。
3. 待胶冷却至 60oC 左右,再加下列成份:
甲醛 3.0 mL
自备 EB (10 mg/mL) 2-4 uL
注意:由于本试剂盒提供的 RNAon 中含 EB,所以也可以不加 EB,但效果较差。如果使用自备的其他染料,如 SYBR Green I,则不能同时使用其他染料,包括含 EB 的 RNAon,用户需要另购不含 EB 的 RNAon)。
4. 混匀后倒胶, 凝固半小时后即可以使用。
二、配制电泳液
5. 将 RNArun 用超纯水稀释十倍后即成电泳液,所需要的体积根据使用的电泳槽决定。
三、变性 RNA 样品
6. 在一干净的离心管中将 5-10 uL RNA 和 15 uL RNAon 混合,85℃保温10 分钟后冰浴 5-10 分钟,直接上样。注意:每一泳道至多可分析 30 ugRNA,通常用 10-20 ug 总 RNA 进行 Northern 杂交,可以检测高丰度mRNA(占 mRNA 总量的 0.1%以上);如待测 RNA 含量极微,每个泳道需加 0.5-3.0 ug poly(A)+ RNA。
四、电泳
7. 电泳时,将凝胶预电泳 5 min(电压为 5 V/cm)。随后加样品和分子量对照(如果有的话),以 3-4 V/cm 的电压电泳,直至染料迁移至胶下游的 3/4 处。
8. 电泳结束后,在 300 nm 紫外灯下拍照。
五、后续处理
9. 按标准方法进行 Northern 杂交等后续处理。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!