找不到产品?留下需求帮您找
一键询价CCFSTTG1 人脑星形细胞瘤 QCH828
一周
3500¥
MM28 人眼葡萄膜黑色瘤細胞 QCH829
一周
5500¥
HCC202 人乳腺原发性导管癌 QCH830
一周
3000¥
HCC2157 人乳腺导管癌细胞(三阴性)QCH831
一周
5000¥
hCMEC/D3-RFP红色荧光蛋白标记的人脑微血管内皮细胞 QCH346R
一周
3500¥
KHYG-1 人NK细胞淋巴瘤细胞 QCH833
一周
3500¥
NCI-h1869 人非小细胞肺癌鳞癌细胞 QCH834
一周
3500¥
NCI-H1417 人小细胞肺癌细胞 QCH835
一周
3500¥
OCI-LY1 人B细胞淋巴瘤QCH836
一周
4000¥
NCI-H2291 人非小细胞肺癌腺癌细胞 QCH837
钦诚生物 | 一周
3000¥
质谱兼容型蛋白银染试剂盒
储存条件:4℃保存,保质期 2 年。
产品内容:
实验准备:(每个溶液均需要新鲜配置)
固定液:400mL/次。自备。
银染步骤:
1. PAGE 电泳(包括非变性 PAGE,SDS-PAGE,尿素-PAGE,2D-PAGE,IEF-PAGE 等)结束后,将 PAGE 胶转移到装有 200 mL 固定液的瓷盘或玻璃盘中,摇晃 30 分钟以去除干扰银染的组分(如甘氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等),倒掉固定液。注:此步很重要,否则银染背景很高。
2. 重复上步一次。
3. 将 PAGE 胶转移到 200 mL 浸泡液 A 中,室温摇晃 30 分钟。
4. 用 200 mL 去离子水漂洗 3 次,每次 5 分钟(不要延长或缩短)。
5. 将 PAGE 胶转移到 200 mL 的染色液 B 中,室温摇晃 20 分钟。
6. 用 200 mL 去离子水漂洗 2 次,每次 1 分钟(不要延长或缩短)。
7. 将 PAGE 胶转移到 200 mL 的显色液 C 中,室温摇晃直到蛋白电泳条带显现(一般需要 10 分钟左右)。
8. 将 PAGE 胶转移到 200 mL 终止液 D 中,室温摇晃终止反应。
9. 用 200 mL 去离子水漂洗 3 次,每次 5 分钟(不要延长或缩短)。
10. 切下条带或胶块进行后续的脱银,原位 trypsin 酶解,多肽沉淀和 MS 分析(略)。
MS 前处理步骤(仅供参考):
1. 脱银:将切下的银染斑点或条带用脱银液(30 mM K3Fe(CN)3 和 100 mM Na2S2O3 的 1:1 的混合液)处理直到黑色消失。
2. 还原:将胶块或胶条置于 10 mM DTT(溶剂为 50 mM NH4HCO3),56℃处理一小时。
3. 烷化:将胶块或胶条置于 55 mM 碘乙酰胺(溶剂为 50 mM NH4HCO3),室温避光处理 45 分钟。
4. 原位 trypsin 酶解:将胶块或胶条置于 10 ng/uL 测序级别的 trypsin 溶液中(溶剂为 25 mM NH4HCO3)37℃处理过夜。
5. 多肽提取:用 5%三氟乙酸抽提酶解液,再用 2.5%三氟乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液,上清真空干燥,沉淀(多肽)最后溶于 0.5%三氟乙酸中。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!