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钦诚生物 | 一周
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MMLV逆转录酶,200U/uL
产品及特点 该酶是突变型的 MMLV 逆转录 DNA 聚合酶,从表达 Moloney MurineLeukemia Virus (莫洛尼氏鼠白血病病)reverse transcriptase 基因(pol基因)的 E.coli 细胞中分离纯化而得,由一个分子量为 76.1 KDa 的单亚基组成,可催化以单链 DNA、RNA 或 DNA:RNA 杂交链为模板的互补 DNA 链的聚合反应。跟野生型相比,它没有 RNase H 活性。
1. 延伸性能好,没有 RNase H 活性,可合成长达 12.5 Kb 的全长 cDNA
2. 本产品提供的 MMLV 酶含 RNase Inhibitor,用户不需要单独准备。
3. 本产品提供的含 dNTP 的 4×MMLV Buffer,用户不需要单独准备。
4. 最佳反应温度为 42℃,但在 50℃时仍有活性,70℃10 分钟能使其失活。
5. 能以 Cy3-,Cy5-,rhodamine-, aminoallyl-,fluorescein 等标记的nucleotides 为底物。
6. 可用于 first strand cDNA 合成,second strand cDNA 合成,DNAlabeling,RNA primer extension 等。
7. 与 PCR 兼容,RT 产物可以用于 PCR 和 Real-time PCR。
8. 能被金属螯合剂,无机磷酸,焦磷酸和多胺抑制。
规格及成分
运输及保存 低温运输,-20℃保存,有限期一年
使用方法 一:合成 PCR 用的 1st-strand cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系:
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃(5 分钟)。
4. 加入 1 μL (=200 U) MMLV 逆转录酶(含 RI),终体积为 20μL。
5. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟, 然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
6. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以 直接作为 PCR 模板使用,不需要纯化。
二:合成建文库用的 1st-strand cDNA
1. 按下表配制 RT 反应体系:
2. 70℃保温 5 分钟后立即冰浴。
3. 37℃保温 5 分钟。对富含二级结构的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保温 5 分钟。如果使用随机引物,则保温温度只能是 25℃(5 分钟)。
4. 加入 1 μL (=200 U) MMLV 逆转录酶(含 RI),终体积为 20μL。
5. 42℃保温 60 分钟(但如果使用随机引物,需要先 25℃保温 10 分钟, 然后再转移到 42℃保温 60 分钟)。
6. 70℃保温 10 分钟以终止反应,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以 用于第二链 cDNA 的合成或放置在-20℃。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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