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Bielschowsky改良法神经组织染色试剂盒
产品及特点 改良 Bielschowsky 神经染色试剂盒是基于 Bielschowsky 镀银染色法开 发的产品，其基本原理为固定后的神经组织和切片浸染于银溶液中，再用还原 剂处理，使银颗粒沉着在轴索的轴浆中使之呈现深棕色或黑色。镀银后可在神 经元胞浆内看到许多交错成网的细丝，并伸向树突及轴突中。本方法可以用于 Alzheimer 疾病和其他神经性疾病的研究。本产品就是基于上述原理开发，它 具有下列特点：
1、一站式、用户不需要单独配制每种成分。
2、使用于石蜡包埋切片和冷冻切片。
3、本方法着色缓慢，便于在显微镜下边观察边操作，方便在得到满意的结 果时终止染色。
4、本产品足够 100 张切片的改良 Bielschowsky 神经染染色。
规格及成分
运输及保存 常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂 载玻片、蒸馏水、显微镜
使用方法
注意事项：下述操作只能使用非常干净的玻璃容器、玻璃染色缸或玻璃脱色缸。 石蜡包埋切片的染色
1. 实验前先将溶液 A（硝酸银溶液）加入到染色缸中放 37℃水浴中预热。
2. 石蜡包埋切片的准备（本试剂盒不含相关试剂）：制备石蜡切片的组织必 须用 10%中性甲醛固定，切片厚度为 8-15 μm。染色前按常规方法脱蜡 到水洗步骤，然后直接进入第 4 步。
3. 冰冻切片的准备（本试剂盒不含相关试剂）：用新鲜组织制备冷冻切片， 厚度为 20-40μm。把切片从恒冷箱中取出，自然凉干或冷风机吹干。浸 入自备的无水乙醇乙醚液（乙醇:乙醚=1:1）稍洗，在自备的 0.5%火棉胶 溶液(以无水乙醇乙醚液为溶剂，乙醇:乙醚=1:1）中浸泡 30 秒，取出切 片，抹去片段底面多余的火棉胶液。将切片放入自备的 80%乙醇中 10 分 钟，蒸馏水洗 1～2min，然后直接进入第 4 步。火棉胶处理可以防止组 织在后续处理时从切片上脱落。
4. 将切片放入 37℃预热的溶液 A（硝酸银溶液）中，并置于 37℃温箱内浸 染 25-35 min。
5. 将切片用蒸馏水洗 3～5min。
6. 将切片放入溶液 B（甲醛溶液）中还原数秒，切片将呈现黄色。
7. 用蒸馏水洗涤切片 3～5min。
8. 将切片放入新鲜配制的氨银溶液工作液中滴染 20-40 秒。氨银溶液工作 液的配制方法如下：在一干净的玻璃试管或小三角中（不要用塑料离心管 或塑料瓶，必须彻底清洗干净）加入 3mL 溶液 C（氨银溶液母液），再加 入 2mL 自备的无水乙醇，混匀后再逐滴加入氨水，直到形成的黑色沉淀 刚溶解（一般需要约 0.75mL 左右的氨水）。氨银溶液工作液需要即配即 用。如果配制其他体积，各成分的用量请按比例增减。
9. 倾去氨银溶液工作液，再将切片放入溶液 B（甲醛溶液）中还原，直到切 片呈棕黑色。一般需要 1-2 分钟。
10. 用蒸馏水洗涤切片 3～5min，
11. 显微镜下观察。如果背景过黑则用溶液 D（氯化金溶液）调色 3～5min， 再用蒸馏水浸泡 1～2min。调色可以使背景更清晰，神经元着色更深。 如果背景合适则直接进入下步，不需要调色。
12. 用溶液 E（硫代硫酸钠溶液）固定 3～5min。此步可以防止褪色。
13. 用蒸馏水洗涤切片 3～5min，然后用滤纸吸干切片周围水分。
14. 用无水乙醇开始的各种浓度的乙醇梯次脱水。如果是冰冻切片，再用无水 乙醇乙醚液（乙醇:乙醚 1:1）去除火棉胶。最后用二甲苯透明，中性树胶 封固保存。
15. 染色结果是神经元、轴突和神经纤维呈深紫色至黑色。细胞核或背景呈现 黄色或金色。白质和灰质呈现黄棕色。
