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获取电话蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性检测试剂盒说明书
微量法
规格: 100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制：
试剂二：临用前加 1 mL 水，配制成 10 mg/mL 蔗糖溶液，再将其用蒸馏水稀释为 500 μg/mL 备用。
产品说明：
蔗糖不仅是重要的光合产物，也是植物体内运输的主要物质，还是碳水化合物的贮存形式之一。蔗糖磷酸合成酶（SPS）以果糖-6-磷酸为受体，形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。一般把蔗糖磷酸酯合成酶蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径。蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。
注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行
冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 480nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
三、SPS 活力单位的计算
1、 按照蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性(U/mg prot)=（C 标准管×V1×ΔA 测÷ΔA 标）÷(V1×Cpr)÷T=50×ΔA 测÷ΔA 标÷Cpr
2、 按照样本质量计算
单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SPS 活性(U/g 质量)= (C 标准管×V1×△A 测÷ΔA 标）÷(W×V1÷V2)÷T=50×ΔA 测÷ΔA 标÷W
C 标准管：标准管浓度，500μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，10min。
注意事项：
尽量在 30min 内完成测定。
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
