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腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGP)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1. 试剂二:临用前每支加入 6.4 mL 双蒸水充分溶解备用;用不完的试剂-20℃分装保存;
2. 试剂三:临用前加入 2 mL 双蒸水充分溶解备用;用不完的试剂-20℃分装保存;
3. 试剂四:临用前每支加入 500 μL 双蒸水充分溶解备用;用不完的试剂-20℃分装保存;
产品说明:
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中,催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG,是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
AGP催化的逆向反应生成G-1-P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH,340nm下测定NADPH增加速率,即可计算AGP活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1.分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2.在 EP 管中按顺序加入下列试剂
三、AGP 活性计算
注意事项:
1、 如果一次性测定样本较多,可以将试剂一、二按比例配成混合液1,将试剂一、三、四和五按比例配成混合液2。
实验实例:
1、 取 0.1g 柳树加入 1mL 提取液冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清置冰上,之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=0.5784-0.4855=0.0929,按样本质量计算酶活得:
AGP 活性(U/g 质量)=380.5×ΔA÷W=353.48 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!